【求助】克隆基因中包含有内含子，表达时会被正确剪切掉吗？

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2021-08-01

问题描述：

真核表达载体 克隆基因的时候把内含子也克隆进去了，在转到细胞里面表达时，这段内含子会被正确剪切掉吗？

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civcul

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应该是不会，所以，我们在做基因克隆表达的时候，都是从RNA到反转录，然后PCR扩增获得能表达蛋白的成熟基因序列。而不是直接从DNA中扩增。外显子是真核生物基因的一部分，它在剪接 (Splicing)后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列, 又称表达序列。既存在于最初的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。内含子是基因内的间隔序列,不出现在成熟的RNA分子中,在转录后通过加工被切除。大多数真核生物的基因都有内含子。在转录后的加工中，从最初的转录产物除去的内部的核苷酸序列。术语内含子也指编码相应RNA内含子的DNA中的区域。

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jgc95

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非常感谢！

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dxc75

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克隆基因中包含的内含子，表达时会被正确的剪切掉的。有些已商品化的载体如pCI-Neo等还特意固定一段内含子(一般是第一内含子)在上面，它有增强转录的功能，在mRNA的成熟过程中可以被正确的剪切掉的。存在于外显子间的内含子在转录后的成熟修饰过程中也应该能被正确的剪切。

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alixtardxy

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展开引用dxc75克隆基因中包含的内含子，表达时会被正确的剪切掉的。有些已商品化的载体如pCI-Neo等还特意固定一段内含子(一般是第一内含子)在上面，它有增强转录的功能，在mRNA的成熟过程中可以被正确的剪切掉的。存在于外显子间的内含子在转录后的成熟修饰过程中也应该能被正确的剪切。......Yes,Ithinkso

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glliutjmu

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展开引用dxc75克隆基因中包含的内含子，表达时会被正确的剪切掉的。有些已商品化的载体如pCI-Neo等还特意固定一段内含子(一般是第一内含子)在上面，它有增强转录的功能，在mRNA的成熟过程中可以被正确的剪切掉的。存在于外显子间的内含子在转录后的成熟修饰过程中也应该能被正确的剪切。......应该是可以剪切的这是机理问题，我们逆转录得到CDNA再做克隆，并不是说不能被剪切，毕竟有时候内含子的存在影响克隆的效率，克隆进去的片段长的话效率低。商品化的载体选择的内含子正是利用了转录的机制，挑选了可以更好配合剪切的内含子，从而增强转录。

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civcul

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glliutjmu应该是可以剪切的这是机理问题，我们逆转录得到CDNA再做克隆，并不是说不能被剪切，毕竟有时候内含子的存在影响克隆的效率，克隆进去的片段长的话效率低。商品化的载体选择的内含子正是利用了转录的机制，挑选了可以更好配合剪切的内含子，从而增强转录。学习了！

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小苗520835

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有谁做过这个实验吗？将含有内含子的片段插入载体中表达，有没有做成功呀？内含子能不能被正常剪切掉呀？

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wj1093595520

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我也遇到这样的问题请问楼主最终是怎样的答案？