Product Description
Product Name | Cat# | Clone# | Isotype | Applications | Reactivity | Unit/Size |
Acetyl-alpha tubulin (Lys40) Monoclonal Antibody | E-AB-20302 | 6B3 | IgG | WB,IHC-p,IF* | Human,Mouse,Rat | 20μL, 60μL, 120μL, 200μL |
Description
Tubulin is the major constituent of microtubules. It binds two moles of GTP, one at an exchangeable site on the beta chain and one at a non-exchangeable site on the alpha chain.
Spec Sheet E-AB-20302 (PDF File)
Synonyms | Anti-Acetyl-alpha tubulin (Lys40) |
Swiss-Prot | P68363 |
Concentration | 1mg/mL |
Host | Mouse |
Immunogen | Synthetic Peptide |
Purification Method | Protein A purification |
Formulation | PBS with 0.02% sodium azide, 0.5% BSA and 50% glycerol, pH7.4 |
Storage | Store at -20?. Avoid freeze / thaw cycles. |
Dilution | WB 1:1000-2000, IHC 1:50-100, IF 1:200 |
Caution must be taken to avoid contact with skin or eyes. In such a case, rinse thoroughly at once with water. Do not ingest, inhale, or swallow. Seek medical attention immediately. Wear appropriate protective clothing such as laboratory overalls, safety glasses and gloves. It is strongly advised that this product should be handled by people who have been well trained in laboratory techniques and that it is handled with care pursuant to the principles of good laboratory practice. All chemicals are deemed potentially harmful. The vial is prone to fall over. Use caution, especially when the lid is off .
FOR RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
* Remark Icon :
WB=Western Blotting, IP=Immunoprecipitation, IF=Immunofluorescence, IHC=Immunohistochemistory, IHC-p=Immunohistochemistory Paraffin, FCM=Flow Cytometry, CH=ChIP Assay
Manufactured by:Elabscience
ebiomall.com
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cDNA文库含有一种生物的部分基因,cDNA本质就是外显子
基因组文库大,其中基因含有启动子和内含子
cDNA文库小,没有内含子和启动子
我用简并引物从鸡cDNA中扩增出一个片段,约250bp,测序后拿来BLAST时却发现,与之同源性最高的并不是其它的Mx基因,而是人的某一个基因,比对的结果中与该序列同源性较高的有人及鼠Mx基因,但是同源性并不是很高。该基因在同一种生物的不同品种中具有多态性,已经有其它的鸡的Mx基因被克隆,按道理如果该片段是Mx基因的一部分它应该与其它的鸡的Mx基因有很高的同源性才对呀,所以,我怀疑简并引物PCR扩增出来的该片段不是Mx基因,因为RACE试剂盒很贵,现在也不敢继续作下去,怕作下去得不到什么结果。现在贴上我BLAST结果中score排在最前面的部分,还请有经验的兄弟帮我分析分析。我不胜感激。
Sequencesproducingsignificantalignments:(bits)Value
gi|19807872|gb|AC087694.3|Homosapienschromosome8,clone...460.033
gi|19073805|gb|AC090733.7|Homosapienschromosome8,clone...460.033
gi|38081550|ref|XM_358891.1|MusmusculussimilartoMyxovi...440.13
gi|47026513|gb|AC024957.9|Musmusculuschromosome16,clon...440.13
gi|13435314|gb|AC090999.1|CaenorhaBDitiseleganscosmidY8...440.13
gi|21955645|emb|AL732599.5|MouseDNAsequencefromcloneR...440.13
gi|199921|gb|J03368.1|MUSMX2Mouseinterferon-inducedMx2m...440.13
gi|31442540|gb|AC138314.4|MusmusculusBACcloneRP23-218B...420.52
gi|21591808|gb|AC092491.6|Homosapiens12BACRP11-125G9(...420.52
gi|40949625|gb|AC127597.5|MusmusculusBACcloneRP23-71A1...420.52
gi|6996929|ref|NM_010846.1|Musmusculusmyxovirus(influen...402.1
gi|15029783|gb|BC011113.1|Musmusculusmyxovirus(influenz...402.1
gi|13938021|gb|BC007127.1|Musmusculusmyxovirus(influenz...402.1
gi|19705454|ref|NM_134350.1|Rattusnorvegicusmyxovirus(i...402.1
gi|16041423|gb|AC091589.8|Homosapienschromosome18,clon...402.1
gi|47104230|gb|BT012815.1|Lycopersiconesculentumclone11...402.1
gi|20270172|gb|AC114485.2|Homosapienschromosome1clone...402.1
gi|28372591|gb|AC008939.8|Homosapienschromosome5clone...402.1
gi|19310326|gb|AC105250.3|HomosapiensBACcloneRP11-39C1...402.1
gi|37537322|dbj|BS000055.1|Pantroglodyteschromosome22c...402.1
gi|37537321|dbj|BS000054.1|Pantroglodyteschromosome22c...402.1
gi|18464281|gb|AC104690.2|HomosapiensBACcloneRP11-183P...402.1
gi|15321560|gb|AC079232.7|HomosapiensBACcloneRP11-360H...402.1
gi|56724|emb|X52713.1|RNMX3RatmRNAforMx3protein402.1
gi|56722|emb|X52712.1|RNMX2RatmRNAforMx2protein402.1
gi|56720|emb|X52711.1|RNMX1RatmRNAforMx1protein402.1
基克隆利用体外重组技术,特定基其DNA顺序插入载体基克隆主要目标识别、离特异基并获基完整 全序列,确定染色体定位,阐明基化功能,明确其特定性状遗传控制关系通几十努力由于植物发育,理化,遗传等科迅速发展,使 掌握量关植物优良性状基物遗传知识,再运用先进酶物技术已经克隆与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆,育性、高蛋白质 及与植物发育关许基我实验室麻抗真菌蛋白基作功能克隆研究(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997),克隆植物基探讨 其克隆,本文论述基克隆策略、及取些进展
1 功能克隆(functional Cloning)
功能克 隆根据性状基本化特性功能信息,鉴定已知基功能克隆(Collis,1995)其具体作:纯化相应编码蛋白构建 cDNA文库或基组文库,DNA文库基筛选根据情况主要用二种办进行,(1)纯化蛋白质进行氨基酸测序,据合寡核苷酸探针cDNA 库或基组文库筛选编码基,(2)相应编码蛋白制相应抗体探针,cDNA入载体表达库筛选相应克隆功能克隆种经典基克隆策略, 基离利用种策略
Hain等葡萄克隆两编码白藜芦醇合二苯乙烯合酶基(Vst1Vst2),葡萄抗菌化合 物白藜芦醇存,提高灰质葡萄孢(Botrytis cinerce)抗性,烟草其些植物二苯乙烯合酶,克隆该基经转基,些植物产灰质葡萄孢抗性意义(Hain 等,1985)Kondo等1989编码水稻巯基蛋白酶抑制剂基组DNA做克隆序列析(Kondo等,1989)周兆斓等构建水稻 cDNA文库,离编码水稻巯基蛋白酶抑制剂cDNA(周兆斓等,1996)植物蛋白酶抑制剂类抗虫物质,抑制摄食害虫蛋白质消 化,使害虫缺乏所需氨基酸导致非发育或死亡胡华等烟草离流行于我黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic virus)(CMV),并克隆编码该病毒外壳蛋白cDNA基(胡华等,1989)王春香等病烟草叶片离纯化马铃薯x病毒 (potato virus X, pvx),克隆完整马铃薯x病毒外壳蛋白基,并外壳蛋白基转入马铃薯,期获抗pvx病毒栽培种马铃薯(王春香等,1991)病毒外壳 蛋白(Coat protein cp)基功克隆,使转基植物产病毒外壳蛋白基介导抗性(Coat Protein Mediated Resistance CPMR)或病毒CP-RNA介导抗性Van kan 报道真菌功克隆毒基Avr9,直接利用基介导广谱高效基工程植物(Van Kan等,1991)我1995构建麻cDNA文库,制备抗体探针功离编码麻抗真菌蛋白基cDNA克隆,抗真菌基农业、医 药等面应用打基础(舒群芳等,1995;舒群芳等,1997)功能克隆特点用基表达产物蛋白质克隆基、虽某性状编码基未 知其理化及代谢途径研究比较清楚,离纯化控制该性状蛋白质功能克隆关键离纯度高蛋白质要纯 蛋白质,十特异探针,策略行效采用功能克隆虽已经克隆基,由于绝数基产物目前知道所数基 难用经典克隆随着物技术发展,条新基克隆策略逐渐形,定位克隆
2 定位克隆(Positional cloning)
根据遗传连锁析,染色体步移基定位染色体具体位置断缩筛选区域进克隆该基,研究该基功能或抗性化机制,种策略 叫定位克隆(Monaco,1994)连锁析即通基与DNA标记间重组系数估计两者间距离,若某种性状基与DNA标记代 离,即连锁起趋势根据原理与已知某DNA标记连锁基染色体定位由于连锁析需要依赖特定基作连锁标记,即标记基 与待研基间存连锁关系,满足与待研基相连锁基实太少,所连锁析克隆数基存着定困难RFLP现使态性基标记存 于整基组内,解决连锁析难克服困难
1980Wyman等科家首建立限制酶切片段度态性RFLP (restriction fragment length polymorphism),使任何种表型相关基定位能限制酶切片段度态性用限制性内切酶切割产DNA片段度态性呈 孟德尔式遗传,存于全基组独特态标记,RFLP使基定位变易行(Wyman等,1980)目前定位克隆般用RFLP等标记制作 遗传图谱,寻找与待测基连锁RFLP标记,获基染色体定位克隆基所RFLP发展起RAPD技术建立,待测基相 准确定位,利用已知基离与连锁未知基其基本程序构建基组文库、用已知A基探针,基组文库筛选与其同源序列 a克隆,再用a克隆探针基组文库筛选与a克隆同源序列b克隆,类推筛选未知基并离目前已番茄、烟草、麦、 水稻、豆、玉米等植物发现与抗病基紧密连锁RFLP标记并构建遗传图谱(Figdore等,1988;Heun等,1991;Smith, 1991;Diers等,1992)用种已别克隆拟南芥菜、番茄、水稻等植物关抗病基(Martin等,1993;Bent等, 1994;Mindrinos等,1994;Wenyuan等,1995) Martin等1993早用定位克隆技术克隆番茄pto基,pto基负责带毒基Avrpto细菌,丁香假单胞菌 (pseudomonas syringae pv)菌株抗性,Pto基导入病番茄转基植株增强病原菌抗性(Martin等,1993)Wenyuan等1995用技术克隆 水稻Xa21基,Xa21基真菌Xanthomonas oryzae pv oryzae (Xoo)具抗性(Wenyuan等,1995)
现在已经把bac克隆的质粒DNA提取出来了,但是在标记探针前,有以下几个疑问:
1:提取出的质粒DNA是否需要通过测序等方法进行验证该克隆的准确性?
2:是否需要把bac克隆的DNA从载体上酶切下来?如果酶切,UCSC数据库中提供的两侧序列末端的酶切位点就是吗?如果不用酶切,那载体片断在探针标记时会不会一同标记上从而影响后续试验结果?
3:在探针标记前,酶切或不酶切得到的bac克隆DNA是否需要进一步纯化?用普通的琼脂糖电泳切胶回收纯化就可以吗?那所用的切胶回收试剂盒应该是哪种的呀?
4:像我这种自己标记好探针,在作fish时,有现成的试剂盒吗?
第一次做fish,有好多不是很清楚的地方,查阅大量文献中也只是提供其中几个关键步骤,希望有经验的朋友提供宝贵意见,给与指导。
非常感谢!!!
序列析:SnapGene ViewerSerialCloner 2-6-1