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2021-08-16
部分分解多肽氨基酸序列 20 个左右残基长度，用编码多肽两端的 PCR 引物进行 PCR 反应，能够检测 PCR 产物的长度，用此法得到的 cDNA 只有几十个碱基对，但它将成为后续筛选基因的重要突破口。 查看更多
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2021-09-02
端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中有高度的保守性（人重复序列为TTAGGG）。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合（如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失）中起重要作用。 查看更多
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2018-12-26
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2021-08-21
SSLP 是含有短的简单序列重复的 DNS 片段，如 (CA)，这些重复分散存在于真核基因组 DNA 中。由于这些 SSLP 在长度上的多态，即等位基因间重复次数的多态，SSLP 是非常有用的遗传学标志。用这些方法达到自动化分型每个标志的关键步骤是选择合适的重复单元侧翼序列的 PCR 引物。 查看更多
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2018-08-06
PCR可用以指数扩增位于两个特定引物杂交位点之间的DNA片段，而在连接介导 的单侧PCR中，本质上，它只需要一个引物杂交位点的特异性，第二个引物是通过连 接反应加上的单一接头。这个接头和旁侧的基因特异性引物一起可以对任 何DNA片段进行指数级的扩增。由于一个确定的已知长度的序.列被加于每个片段，可以完整地扩增一些复杂的DNA群体，如分辨率达到单碱基水平的序列梯。来源：《精编分子生物学实验指南》第五版 查看更多
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2021-07-21
PCR扩增产物的克隆可以：（1）获得目的DNA片段；（2）用于原核表达的研究；（3）广泛应用于分子生物学相关研究。 查看更多
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2018-11-28
Severn Biotech公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2018-08-06
该方案中，用 PCR 分析由质粒载体编码的随机多肽文库。该文库是由连接反应的产物转化细菌后得到的，方案 2 已经介绍过，然后再用标准的程序对质粒进行扩增和纯化。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。 查看更多
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2021-07-16
多莉（Dolly，1996年7月5日 - 2003年2月14日）是一只通过现代工程创造出来的雌性绵羊，也是世界之初第一个成功克隆的人工动物。按照官方的说法，名字是按照美国乡村音乐天后多莉·帕顿（Dolly Parton）来命名，因为多莉·帕顿拥有一对丰满的豪乳，而多莉是由乳腺细胞发育而来的。多莉是用细胞核移植技... 查看更多
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2021-07-30
DNA甲基化是一种表观遗传修饰，它是由DNA甲基转移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（mC）的一种反应，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱基。 查看更多
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2018-08-06
克隆抗原受体重组出现于大多数淋巴瘤细胞，因此该标记被用于第 1 步淋巴组织活检。易位则用于第 2 步检查，对肿瘤进行分型。对于组织学和其他结果预示有特殊移位存在的情况可以直接检测易位。抗原受体重组不适用于大多数非淋巴细胞白血病，在这些病例中染色体易位是唯一适合的分子标记。 查看更多
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2021-09-05
许多真核生物的基因所包含的 DNA，远非单个重组子所能容纳得了的。对于大多数染色体来说，更是如此。因此，必须构建一套重叠的 DNA 克隆，这些克隆的 DNA 按次序排列能形成叠连序列（叠连群），可以涵盖一个很大的基因或目的区域。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多
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辩论稿:克隆的好处与坏处123
梅桂华丽2021-09-01
克隆许优点：
1）克隆技术减轻些能母亲性痛苦
2）克隆实验实施推遗传发展制造物器官移植辟前景
3）克隆技术用于治疗神经系统损伤神经组织再干细胞修复神经损伤
克隆许缺点避免： 1）克隆技术干扰自演化程
2）克隆技术种昂贵技术需要量资金物专业参与失败率高
3）克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制4）克隆技术用于创建超或强壮体魄智力迟钝外克隆技术效使用类遗传男性失意义
所说科技双刃剑优点缺点并没标准答案看着使用
1）克隆技术减轻些能母亲性痛苦
2）克隆实验实施推遗传发展制造物器官移植辟前景
3）克隆技术用于治疗神经系统损伤神经组织再干细胞修复神经损伤
克隆许缺点避免： 1）克隆技术干扰自演化程
2）克隆技术种昂贵技术需要量资金物专业参与失败率高
3）克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制4）克隆技术用于创建超或强壮体魄智力迟钝外克隆技术效使用类遗传男性失意义
所说科技双刃剑优点缺点并没标准答案看着使用
关于病毒在宿主细胞内的复制过程,正确的描述是中华考试网123
2021-08-04
病毒通常由具有蛋白质外壳的遗传物质组成，它通过穿透细胞膜并向细胞释放大量的病毒遗传物质而感染细胞。利用宿主细胞上特定的膜上病毒输送蛋白，进入感染的宿主细胞，向细胞释放大量的病毒遗传物质而感染细胞。由于细胞为无性体，因此它们依赖复制蛋白质或宿主细胞的“机体”来复制自己的DNA物质。从而篡夺细胞功能为其服务。其结果或使细胞死亡。病毒控制细胞。或着产生变异。正常细胞的蛋白质合成，细胞分裂是受结构基因、基因的调节系统所控制的。由于控制细胞增殖的结构基因发生突变，调节系统对它失去控制，结果就会造成细胞无限的增殖。如果是有关的调节基因发生了突变，它不再能产生有效的阻遏物质，控制增殖的结构基因的转录和翻译就会不断地进行，结果也将导致细胞的无限增殖。细胞发生变异。从而导致细胞癌变。
【求助】有人做DNA拓扑异构酶Ⅰ的吗 PCR技术讨论版论坛123
zhangbo71172021-08-13
请问，有人做DNA拓扑异构酶Ⅰ的吗？不知哪个实验室可以提供一些，谢谢。
[原创] Western blot转膜整个过程 123
苦丁奶茶2021-08-31
听说种找相近物种该基全序列做比找内含位置再设计引物内含区域测序没用种能能说具体操作选物种用软件比较序列
基因克隆的基本步骤有哪些 123
瘦or死1492021-08-14
选择目基,并设计相应引物；
用引物PCR扩增目基片段；
选择合适（抗性标记、酶切位点等）克隆载体（保真扩增）,并PCR片段连接入克隆载体；（般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连）
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增；
肠杆菌提取质粒（即前面连接产物）,酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
用引物PCR扩增目基片段；
选择合适（抗性标记、酶切位点等）克隆载体（保真扩增）,并PCR片段连接入克隆载体；（般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连）
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增；
肠杆菌提取质粒（即前面连接产物）,酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案 微生物 综合其他 ...123
kflame1232008-03-31
我想克隆山羊的一个基因，可是在NCBI上只找到小鼠的序列，请教一下大家该怎么做，尽量说的详细一点，谢谢了
应用细菌分子间同源重组机制快速克隆腺病毒基因组的研究123
hixpp2021-07-29
最近在做腺病毒基因克隆，吃了大亏，长了见识。
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV，进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒，过夜酶切，也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初，我没有BJ5183Ecoli菌株，就想当然像拿DH5a替代，但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行，挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒，就是同时含有两种质粒，即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的，二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株，采用电转化法，这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是，另外2个总是失败，原因不详。于是我就重复重复，期间，糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破，Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡，于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是，这毫无帮助，电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子，心疼的是我的细菌、质粒，用Tip又吸不出来，所以只好把它们丢掉。
Finally，我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析，原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积（>15ul）的质粒到BJ5183Ecoli菌（20ul）中时，里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流，结果杯子就破了。由此看来，气泡本身对电击可能不无影响，反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了，离子强度太高，足以导致一次实验报废。
后感：失败并不可怕，可怕的是想当然去重复，而不去探究失败的原因。朋友们，如在这方面好的经历坏的经历，尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV，进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒，过夜酶切，也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初，我没有BJ5183Ecoli菌株，就想当然像拿DH5a替代，但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行，挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒，就是同时含有两种质粒，即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的，二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株，采用电转化法，这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是，另外2个总是失败，原因不详。于是我就重复重复，期间，糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破，Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡，于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是，这毫无帮助，电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子，心疼的是我的细菌、质粒，用Tip又吸不出来，所以只好把它们丢掉。
Finally，我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析，原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积（>15ul）的质粒到BJ5183Ecoli菌（20ul）中时，里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流，结果杯子就破了。由此看来，气泡本身对电击可能不无影响，反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了，离子强度太高，足以导致一次实验报废。
后感：失败并不可怕，可怕的是想当然去重复，而不去探究失败的原因。朋友们，如在这方面好的经历坏的经历，尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
【求助】如何克隆启动子 经验共享 123
drcrc2021-08-24
打算克隆某个基因的启动子，基因5‘端上游基因组序列，在pubmed里能查到。
是不是只要从细胞里面提取基因组DNA,然后按照pubmed上的5端上游序列做一个PCR就可以了？
是不是只要从细胞里面提取基因组DNA,然后按照pubmed上的5端上游序列做一个PCR就可以了？
克隆基因的主要目的有四个:(1)(); (2)();&..._123
zqnever2017-11-07
克隆基主要目4
DNA拓扑异构酶概述123
0864181662017-11-07
依托泊苷，抑制有丝分裂，属于细胞周期特异性药物，使细胞分裂停止于S期或G2期，此方案应先用VP-16，后顺铂:VP-16的作用靶点是DNA拓扑异构酶Ⅱ。顺铂属于细胞周期非特异性药物
你认为目前若实施人类克隆,在技术上还存在哪些难题?会引起哪些...123
╲°泪祭_78812021-07-25
基检测：
DNA杂交技术
DNA-RNA杂交技术
抗体抗原杂交技术
DNA杂交技术
DNA-RNA杂交技术
抗体抗原杂交技术
EST序列的基因克隆 123
颜魅家族Gj2021-08-15
利用计算机协助克隆基称电基克隆（sillcon cloning）与定位克隆、定位候选克隆策略并列即采用物信息延伸EST序列获基部乃至全cDNA序列EST数据库迅速扩张已经并继续导致识别与克隆新基策略发革命性变化
4.1
EST序列获取
利用计算机协助克隆第步必须获兴趣ESTdbEST数据库找EST途径寻找同源序列标准：度≥100bp同源性50%、85%通数万维网界使用BLAST检索程度实现其用NCBI（National Center for Biotechnology Information）GenBank、意利TigemESTmachine（包括EST提取者EST组装机器）、THC（Tentative Human Consensus Sequences）数据库、ESTBlast检索程序——通英类基组作图项目资源（Human Genome Mapping Project Resource CenterHGMP—RC）服务器访问检序列组装重叠群（contig）重叠群检序列重复进行BLAST检索与序列组装延伸重叠系列重复程直没更重叠EST检或者说重叠群序列能继续延伸获全基编码序列获些EST序列数据再与GeneBank核酸数据库进行相似性检测假凤精确匹配基EST序列数据据EST六种阅读框翻译蛋白质接着与蛋白质序列数据库进行比较析基析结致三种：第已知基研究象类已鉴定解基；第二前未经鉴定新基；第三未知基部基间同种或异种基匹配新基未知基进步用于物研究
4.2
基电定位
基电定位采用NCBI电PCR程序进行检索寻找EST序列否存序列标签位点（sequence tagged sites,STS）STS作基组单拷贝序列新代遗传标记系统其数目覆盖密度较达平均每1kbSTS或更密集寻找STS与相应染色体相比较即序列定位该染色体
4.3
IMAGE克隆索取
许ESTs所应cDNA克隆通基组及其表达整合析（intergrated molecular analysis of genomes and their expressionIMAGE）协定免疫索取与电基克隆相辅相IMAGE协定由美LLNL家实验室主持宗旨共享排列cDNA文库克隆重规模EST测序项目Merk&Cow公司投资类ESTs项目等都加入IMAGE协定研究者通另外途径基部序列并通同源性检索发现该片段与加入IMAGE协定EST序列高度同源便免费索取其原始克隆通美ATCC组织（American Type Culture Collection）索取避免或减轻筛选全基麻烦集精力进行基功能研究图" class="ikqb_img_alink">
4.1
EST序列获取
利用计算机协助克隆第步必须获兴趣ESTdbEST数据库找EST途径寻找同源序列标准：度≥100bp同源性50%、85%通数万维网界使用BLAST检索程度实现其用NCBI（National Center for Biotechnology Information）GenBank、意利TigemESTmachine（包括EST提取者EST组装机器）、THC（Tentative Human Consensus Sequences）数据库、ESTBlast检索程序——通英类基组作图项目资源（Human Genome Mapping Project Resource CenterHGMP—RC）服务器访问检序列组装重叠群（contig）重叠群检序列重复进行BLAST检索与序列组装延伸重叠系列重复程直没更重叠EST检或者说重叠群序列能继续延伸获全基编码序列获些EST序列数据再与GeneBank核酸数据库进行相似性检测假凤精确匹配基EST序列数据据EST六种阅读框翻译蛋白质接着与蛋白质序列数据库进行比较析基析结致三种：第已知基研究象类已鉴定解基；第二前未经鉴定新基；第三未知基部基间同种或异种基匹配新基未知基进步用于物研究
4.2
基电定位
基电定位采用NCBI电PCR程序进行检索寻找EST序列否存序列标签位点（sequence tagged sites,STS）STS作基组单拷贝序列新代遗传标记系统其数目覆盖密度较达平均每1kbSTS或更密集寻找STS与相应染色体相比较即序列定位该染色体
4.3
IMAGE克隆索取
许ESTs所应cDNA克隆通基组及其表达整合析（intergrated molecular analysis of genomes and their expressionIMAGE）协定免疫索取与电基克隆相辅相IMAGE协定由美LLNL家实验室主持宗旨共享排列cDNA文库克隆重规模EST测序项目Merk&Cow公司投资类ESTs项目等都加入IMAGE协定研究者通另外途径基部序列并通同源性检索发现该片段与加入IMAGE协定EST序列高度同源便免费索取其原始克隆通美ATCC组织（American Type Culture Collection）索取避免或减轻筛选全基麻烦集精力进行基功能研究图" class="ikqb_img_alink">
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