Certificate of Analysis | |
Antibody Clone: | 16A8-IgE |
Vial: | Orange Cap; 200µl |
Origin: | Monoclonal antibody derived from a patient allergic to peanut. |
Specificity: | Ara h 2, Arachis hypogaea allergen. |
Allergen: | Natural Ara h 2 (product code NA-AH2-1) |
IgE Concentration: | 50,000 IU/mL based on ImmunoCAP using WHO International Standard Immunoglobulin E (IgE), human serum (NIBSC code 11/234) |
Quantity: | 10,000 IU in 0.2mL (1.0 IU= ~2.4ng IgE) |
| Formulation: | In phophate buffered saline, pH 7.4 and 0.05% Tween-20. 0.22µm filtered,preservative free. |
Storage: | Maintain at -20°C for up to 12 months. Avoid repeated freeze-thaw cycles. Store product undiluted. No stability data available. |
| Product Resources: | E-16A8 Certificate of Analysis |
| References: | Wurth, M.A. et al., Human IgE mAbs define variability in commercialAspergillus extract allergen composition, JCI Insight. 2018;3(20):e123387. Bazaral, M. and Hamburger, R.N., Standardization and stability ofimmunoglobulin E, J Allergy Clin Immunol 1972; 49:189-191. PMID4622102. |
For research and in vitro diagnostic use only:Not for human in vivo or therapeutic use. | |
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1)克隆技术减轻些能母亲性痛苦
2)克隆实验实施推遗传发展制造物器官移植辟前景
3)克隆技术用于治疗神经系统损伤神经组织再干细胞修复神经损伤
克隆许缺点避免: 1)克隆技术干扰自演化程
2)克隆技术种昂贵技术需要量资金物专业参与失败率高
3)克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制4)克隆技术用于创建超或强壮体魄智力迟钝外克隆技术效使用类遗传男性失意义
所说科技双刃剑优点缺点并没标准答案看着使用
用引物PCR扩增目基片段;
选择合适(抗性标记、酶切位点等)克隆载体(保真扩增),并PCR片段连接入克隆载体;(般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连)
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增;
肠杆菌提取质粒(即前面连接产物),酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
我总共要做6个克隆。先把6个基因的CDNA克隆到shuttle质粒pAdTrack-CMV,进展很顺利。然后用PmeI处理重组shuttle质粒,过夜酶切,也很顺利。但与腺病毒backbone质粒pAdEasy-1共转化时遇到了大麻烦。起初,我没有BJ5183Ecoli菌株,就想当然像拿DH5a替代,但一直不成功。无论CaCl2法和电转法都不行,挑出来的克隆不是只含重组shuttle质粒,就是同时含有两种质粒,即重组shuttle质粒和pAdEasy-1。但各是各的,二者并没有在细菌内发生同源重组。
于是我借了BJ5183Ecoli菌株,采用电转化法,这时总算有点成功。6个重组腺病毒质粒构建成功了4个。经酶切鉴定均这4个克隆均正确。但是,另外2个总是失败,原因不详。于是我就重复重复,期间,糟糕的事情发生了....电转杯总是被击破,Bio-Rad电转仪总是出现"检测到低压故障电弧”的字样。想来想去找不到好的对策。起初我以为是有气泡,于是在做电转时尽可能避免气泡的出现。遗憾的是,这毫无帮助,电转杯还是击一个破一个。我那个心疼呀。倒不是心疼杯子,心疼的是我的细菌、质粒,用Tip又吸不出来,所以只好把它们丢掉。
Finally,我发现了其中的问题。我改用去离子水来溶解重组shuttle质粒和pAdEasy-1时电转杯就再也不破了。我分析,原因可能与电转菌液的离子强度有关。当我放较大体积(>15ul)的质粒到BJ5183Ecoli菌(20ul)中时,里面的TE缓冲液可能导致电击时产生高强度电流,结果杯子就破了。由此看来,气泡本身对电击可能不无影响,反而会减弱电流强度。但离子强度就不同了,离子强度太高,足以导致一次实验报废。
后感:失败并不可怕,可怕的是想当然去重复,而不去探究失败的原因。朋友们,如在这方面好的经历坏的经历,尽可拿出来一起分享。
让我们一起成长。
是不是只要从细胞里面提取基因组DNA,然后按照pubmed上的5端上游序列做一个PCR就可以了?
DNA杂交技术
DNA-RNA杂交技术
抗体抗原杂交技术
4.1
EST序列获取
利用计算机协助克隆第步必须获兴趣ESTdbEST数据库找EST途径寻找同源序列标准:度≥100bp同源性50%、85%通数万维网界使用BLAST检索程度实现其用NCBI(National Center for Biotechnology Information)GenBank、意利TigemESTmachine(包括EST提取者EST组装机器)、THC(Tentative Human Consensus Sequences)数据库、ESTBlast检索程序——通英类基组作图项目资源(Human Genome Mapping Project Resource CenterHGMP—RC)服务器访问检序列组装重叠群(contig)重叠群检序列重复进行BLAST检索与序列组装延伸重叠系列重复程直没更重叠EST检或者说重叠群序列能继续延伸获全基编码序列获些EST序列数据再与GeneBank核酸数据库进行相似性检测假凤精确匹配基EST序列数据据EST六种阅读框翻译蛋白质接着与蛋白质序列数据库进行比较析基析结致三种:第已知基研究象类已鉴定解基;第二前未经鉴定新基;第三未知基部基间同种或异种基匹配新基未知基进步用于物研究
4.2
基电定位
基电定位采用NCBI电PCR程序进行检索寻找EST序列否存序列标签位点(sequence tagged sites,STS)STS作基组单拷贝序列新代遗传标记系统其数目覆盖密度较达平均每1kbSTS或更密集寻找STS与相应染色体相比较即序列定位该染色体
4.3
IMAGE克隆索取
许ESTs所应cDNA克隆通基组及其表达整合析(intergrated molecular analysis of genomes and their expressionIMAGE)协定免疫索取与电基克隆相辅相IMAGE协定由美LLNL家实验室主持宗旨共享排列cDNA文库克隆重规模EST测序项目Merk&Cow公司投资类ESTs项目等都加入IMAGE协定研究者通另外途径基部序列并通同源性检索发现该片段与加入IMAGE协定EST序列高度同源便免费索取其原始克隆通美ATCC组织(American Type Culture Collection)索取避免或减轻筛选全基麻烦集精力进行基功能研究图" class="ikqb_img_alink">

