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제품특징
□ 특징
본 제품은 Dual-Labeled probe를이용하는 Real Time One Step RT-PCR 전용 Kit 이다*. Real Time RT-PCR을 하나의 튜브 내에서 연속적으로 실시할 수 있기 때문에 조작이 간편하며 오염의걱정이 없고, RNA 바이러스 등 미량의 RNA 검출에 최적이다.또한, 증폭 산물을 실시간으로 검출할수 있어 PCR 후에 전기영동 등으로 확인할 필요가 없다.반응에는 신장성이 뛰어나고 단시간의 반응으로 효율적인 cDNA 합성이 가능 한 PrimeScript™ RTase와 PCR 효소로서 정평이 있는TaKaRa Ex Taq® HS를 이용하여, 1Step RT-PCR 에 최적화되어 있다.종래의 제품보다 반응 특이성, 증폭효율이 향상되어 있어, 안정된 Real Time 1 StepRT-PCR를 실시할 수 있다.* TB Green™을이용하는 Real time One Step RT-PCR에는 One Step TB Green™PrimeScript™PLUS RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code RR096A)One Step TB Green™PrimeScript™RT-PCR Kit II (Perfect Real Time) (Code RR086A)One Step TB Green™PrimeScript™RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code RR066A) 을 추천한다.
□ 내용 (100 회；50㎕ 반응)
2x One Step RT-PCRBuffer III *1 | 840㎕×3 |
TaKaRa Ex Taq HS (5 U/㎕) | 100㎕ |
PrimeScript RT enzyme Mix II*2 | 100㎕ |
RNase Free dH2O | 1.25 ㎖×2 |
ROX Reference Dye (50×conc)*3 | 100㎕ |
ROX Reference Dye II (50×conc)*3 | 100㎕ |
*1: dNTP Mixture, Mg2+을 포함 *2: RNase Inhibitor를 포함 *3: Life Technologies의 Real Time PCR 장치 등 well 간 형광 신호를 보정하는 장치로 해석하는 경우에 사용한다.
● ROXReference Dye(50×)을 첨가하는 기종 AppliedBiosystems 7300 Real-Time PCR System (Life Technologies)StepOnePlusReal-Time PCR System (Life Technologies)
● ROX ReferenceDye II(50×)을 첨가하는 기종 AppliedBiosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System (Life Technologies)
● 첨가가 필요 없는 기종 ThermalCycler Dice Real Time System III (Code TP950/TP970/TP980)ThermalCycler Dice Real Time System II (Code TP900/TP960)ThermalCycler Dice Real Time System Single (Code TP850/TP870)ThermalCycler Dice Real Time System Lite (Code TP700/TP760)SmartCycler System/Smart Cycler II System (Cepheid사)LightCycler96/LightCycler 480 System (Roche Diagnostics사)CFX96Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad사)
□ 보존 - 20℃
□ 사용상의 주의
본 Kit에 의한 역전사 반응에는 PCR용의 Specific 프라이머 (Reverse)를 이용해야 합니다. Random 프라이머나 Oligo dT 프라이머는 사용할 수 없습니다.
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设计引物候引物度设置25-27左右
我想用一个链霉素抗性的载体pCDFDuet™和一个卡纳pet28a或者氨卞pet32a的载体共转化入表达菌株rosetta。有什么可能的问题吗？
序列析：SnapGene ViewerSerialCloner 2-6-1
现在已经把bac克隆的质粒DNA提取出来了，但是在标记探针前，有以下几个疑问：
1：提取出的质粒DNA是否需要通过测序等方法进行验证该克隆的准确性？
2：是否需要把bac克隆的DNA从载体上酶切下来？如果酶切，UCSC数据库中提供的两侧序列末端的酶切位点就是吗？如果不用酶切，那载体片断在探针标记时会不会一同标记上从而影响后续试验结果？
3：在探针标记前，酶切或不酶切得到的bac克隆DNA是否需要进一步纯化？用普通的琼脂糖电泳切胶回收纯化就可以吗？那所用的切胶回收试剂盒应该是哪种的呀？
4：像我这种自己标记好探针，在作fish时，有现成的试剂盒吗？
第一次做fish，有好多不是很清楚的地方，查阅大量文献中也只是提供其中几个关键步骤，希望有经验的朋友提供宝贵意见，给与指导。
非常感谢！！！
我现在做的课题研究的是肾脏肿瘤。其中有实验涉及到FISH。咨询和查阅过相关文献和公司，一个染色体荧光探针的价格贵的惊人（动不动近万），做过这方面实验的老师，情况是这样的吗？
我要做的是在石蜡切片上进行FISH实验，操作难度是不是很大？有没有公司可以帮助完成此类实验呢？
请知道的老师给我帮助，谢谢！！
