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| 实验方法原理 | PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性、退火、延伸三步，经过一定的循环，介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。 | ||||||
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| 实验材料 | 转基因水稻叶片DNA引物 试剂、试剂盒 | 矿物油MgCl2PrimerdNTP水溴酚蓝琼脂糖凝胶EB 仪器、耗材 | 离心机电泳仪紫外检测仪 实验步骤 | 1. 调整模板浓度至10 ng/ml 2. 按下列体系配制反应混合液，混匀，加一滴矿物油，离心5秒 Template DNA （20 ng）2 buffer 2.0 ´10μl MgCl2（25mM） 1.5 μl lmPrimer F(10mM) 0.2 μl Primer R (10mM) 0.2 μl lmdNTPs（2mM） 2.0 μl Taq（5U/μl） 2.0 μl Add ddH2O to 20 μl 3. PCR反应循环条件设置： 95℃ 1 cycle 94℃ 55℃ 1" 72℃ 1"30" 35 cycles 72℃ 1 cycle 4℃ forever 溴酚蓝，混匀，短暂离心，取15ml 4. 检测：加2 ml反应产物点样电泳； 5. 在1%的琼脂糖凝胶上点样电泳；EB染色，紫外观察。 |
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发布于 ： 2021-09-06
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