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Cell Technology/DNACasp/25/DNACASP3
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Cell Technology/DNACasp/25/DNACASP3
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Cell Technology
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DNACASP3
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Introduction

1. Antibody to Single Stranded DNAA widely used cytochemical technique for evaluation of DNA damage associated with apoptosis is the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated in situ end labeling or TUNEL assay. However the TUNEL assay has its drawbacks in that false positive staining makes the assay unreliable as a marker for apoptosis 1-5. A more universal and specific marker for detecting apoptosis associated DNA damage is to measure the morphological changes in nuclei that reflect chromatin condensation into compact masses. 6-7. Further biochemical and cytochemical studies have demonstrated the increased susceptibility of apoptotic DNA to thermal denaturation. Analysis of nuclei by scanning calorimetry to detect thermal induced DNA denaturation and analysis of DNA fragmentation by electrophoresis have shown that intact apoptotic DNA is susceptible to denaturation at lower temperatures then that of non-apoptotic cells 8.

2. Antibody to Active Caspase 3Apoptosis is an evolutionarily conserved form of cell suicide, which follows a specialized cellular process. The central component of this process is a cascade of proteolytic enzymes called caspases. These enzymes participate in a series of reactions that are triggered in response to pro-apoptotic signals and result in cleavage of protein substrates, causing the disassembly of the cell 13. Caspases have been identified in organisms ranging from C. elegans to humans. The mammalian caspases play distinct roles in apoptosis and inflammation. In apoptosis, caspases are responsible for proteolytic cleavages that lead to cell disassembly (effector caspases), and are involved in upstream regulatory events (initiator caspases). An active caspase consists of two large (~20 kD) and two small (~10 kD) subunits to form two heterodimers which associate in a tetramer 14-16. As is common with other proteases, caspases are synthesized as precursors that undergo proteolytic maturation, either autocatalytically or in a cascade by enzymes with similar specificity 17. Caspase 3, also known as CPP-32, Apopain or Yama, is a key effector caspase in the apoptotic pathway 18. It is present in many different cell lineages and is responsible for the cleavage of a variety of molecules such as poly ADP-ribose polymerase (PARP), protein kinase Cd, actin and DNA-dependent protein kinase 19-20.

Key Benefits

  • Much more Reliable as compared to TUNEL assays - No False positive signals.
  • Multiple parameter detection of DNA damage and caspase 3 activity simultaneously.
  • Readout - Flow cytometry, Fluorescence 96 well plate reader, Fluorescence microscope.
  • Yields both quantitative and qualitative results. Gives a strong positive signal.
  • Ease Of Use: Dual parameter results to confirm apoptosis in cells.
  • Compatible with human, mouse, rat, bovine, porcine species.

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双向电泳是研究蛋白质组学的一种有效方法。与单向电泳相比,它能从复杂的蛋白质混合物中分离出更多的成分。电泳时,蛋白质迁移速度取决于它们的分子形状、大小及所带电荷多少,双向电泳利用后两项特征使蛋白质能够有效分离。[澳] 理查德 J. 辛普森 (Richard J.Simpson) 主编 何大澄 主译 查看更多>
2018-12-26
蛋白纯化和填料问答,基因涵盖了大部分问题,非常经典和实用 点击浏览该文件 查看更多>
Northern blot 是研究基因表达的最严谨的方法之一,可以定量分析组织中某一特异 mRNA 的表达丰度,根据其迁移位置也可以判断基因表达转录物的大小。该技术应用十分广泛,常用于分析 RNA 样品中特定 mRNA 的大小和丰度,也可用于基因表达调控、基因结构及功能、遗传变异等研究。 查看更多>
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。 查看更多>
血红蛋白是一种结合蛋白质,由血红素和珠蛋白组成。正常人所含珠蛋白的多肽链有a、b、d 、e、g和z六种。这六种肽链的基因在人体发育的不同阶段表达状况不一。正常成人红细胞中有三种血红蛋白即HbA、  HbA2 和 HbF。HbA(a2b2)是正常成人红细胞中的最主要的血红蛋白,占红细胞内血红蛋白总量的96%以上,PI=6.7。 HbA2(a2d2) 是正常成人红细胞中的次要成分,占2~3% 左右,其PI>6.7。 HbF(a2g2)为胎儿血红蛋白,胎儿出生后六个月急剧持续下降至血红蛋白总量的1%以下, 查看更多>
肽谱(或蛋白质指纹图谱)是指蛋白质利用酶解法或化学方法裂解后得到肽片段,对其进行分离、分析而获得的图谱。这项技术能提供的信息,不仅包括蛋白质的构象和蛋白质之间的相互关系(比较型肽谱),还包括蛋白质的一级结构(分析型肽谱)。[澳] 理查德 J. 辛普森 (Richard J.Simpson) 主编 何大澄 主译 查看更多>
本实验目的是掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理,垂直板状凝胶电泳槽的使用和凝胶配制方法以及学会利用相对迁移率和蛋白质色带形状分析蛋白质种类。 查看更多>
生物谷编者按:目前大量的基因转录和表达资源,但却没有良好的实验方法和手段,本文提供了一个新的思路去分析这些大量信息,生物信息学专业人员应该值得参考,后附全文下载(PDF)High-throughput protein analysis integrating bioinformatics and experiment 查看更多>
双向电泳(twodimentionlal gel electrophoresis, 2-DE ) 技术,特别是以固相 pH 梯度等电聚焦为第一向的双向电泳技术是当前分辨率最高,信息量最大的电泳技术。本实验来源「蛋白质电泳实验技术」主编:郭尧君。 查看更多>
凡盐析所获得的粗制蛋白质(盐析得到的IgG)中均含有硫酸铵等盐类,这类将影响以后的纯化,所以纯化前均应除去,此过程称为“脱盐” (desalthing)。脱盐常用透析法和凝胶过滤法,这两种方法各有利弊。前者的优点是透析后析品终体积较小,但所需时间较长,且盐不易除尽;凝胶过 滤法则能将盐除尽,所需时间也短,但其凝胶过滤后样品体积较大。 查看更多>
制备用于电泳的酵母 DNA,先用酶破坏酵母细胞胞壁,然后在熔化的低熔点琼脂糖中混悬,制成栓。将栓浸入含蛋白酶的裂解缓冲液,以加速细胞裂解和除去蛋白质。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介绍的方法上略有改进,它可用于制备作为 高分子质量标准的酵母染色体和酵母人工染色体(YAC)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多>
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小女子请教各位前辈,实验室需要做双向电泳,是购置一台双向电泳仪一体机合适还是买两个电泳仪分别做第一向等电聚焦,第二向sds凝胶电泳合适,还有哪个牌子比较好,性价比高的,谢谢
Bio-RadMini-II垂直电泳仪一开始就显示“E1”,有时显示“E10”。好不容易不报错了,在80V的恒压下,电流才2mA,以前一直未出现这种情况。听其他人建议,更换了电泳缓冲液,仍然不行。呜呜呜,我把所有的样品都加进去了,结果…………
请问各位战友有谁用过如题的血红蛋白电泳仪?效果如何?好像这款仪器无需手工洗涤红细胞,实现了自动化分析...

小弟这个学期开学以来,电泳槽的液体因为假期无人看管就干了,我用了酒精冲洗好几遍后,电泳槽泡出来的电泳就一直有问题,当你第一次用新电泳液跑的时候还比较好,但是用了两三次之后就会摸带,需要极其频繁的更换电泳液,纯水消耗量极大,请问各位大神如何修复?

TIF格式的图片无法上传。。。。如果需要图片我再转格式发过来,谢谢各位。

我一直用垂直电泳仪做SDS-PAGE电泳,但最近试验室要买台电泳仪,管理员要买一台水平的电泳仪,我查阅资料没有看到有用水平电泳仪做蛋白的,比较困惑,请问谁能帮我解答垂直和水平的区别?谢谢!
哪位同行知道国产的全自动电泳仪有哪些?最好有技术参数,谢谢!
SDSPAGE电泳常见问题123
zhaohengyan20082014-07-10
我们用的是手工点样电泳法,昨天发现点样后,放在电泳槽上的膜条,没几分钟就开始发现点样线移动了。一般点...
需购买电泳仪(包括电源)、离心机,不知道哪个品牌的比较好,价格如何,能否控制在5万元以下?
电泳仪要能够分析蛋白质、DNA、RNA,不知道要怎么配置?
谢谢各位的帮助!
如:法国sebia电泳仪或意大利英特雷勃(InterLab)全自动电泳仪。
求问是我的使用方式不对吗?
师兄说每次一定要两块胶一起跑电泳才能形成回路,但是制胶因为只有一个制胶架,就只能分两次弄
想问一下一般都是这样的吗?还有加了浓缩胶插了梳子之后一定要等2h才能让胶充分凝固吗?
由于单位考核需要电泳仪,故在北京六一厂紧急购买了一台便宜(3000)的电泳仪,到货后发现除了一个电源,还有很多塑料板,夹子什么的,不知道怎么弄才好,以前没接触过此类实验,听说先要制胶,不知拿什么做,怎么做?请园子里的前辈们指点一下,比较急啊!在线等
核酸电泳仪与蛋白质电泳仪有何不同?