[ CF ]徐艺智东洋生命科学Remial Remonme Ratt Matt精华液发酵...
实验方法原理 | 与琼脂糖凝胶不同,聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭,因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而,电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光,所以检测DNA的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBRGold(Molecularprobes)进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。它也不能在聚合过程中掺入到凝胶中,这样会妨碍DNA的迁移并使DNA条带变形。亚甲蓝染色检测的灵敏度低,但较之前两种染料价格低廉,也可选用。 | ||||
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试剂、试剂盒 | 溴化乙锭溶液SYBRGold贮存液或亚甲蓝贮存液 仪器、耗材 | 聚丙烯酰胺凝胶 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液和溶液 染料溶液:溴化乙锭溶液(贮存液0.5μg/ml),SYBRGold贮存液或亚甲蓝贮存液(0.001%~0.0025%,TAE缓冲液配制) 2.凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 二、方法 1.将凝胶及其附着的玻璃板轻轻地浸入需用染色液中,染色液正好将凝胶没住即可。室温染色30~45min。 2.以玻璃板为支撑物将凝胶从染色液中取出,水冲洗后用一叠Kimwipes纸巾蘸去凝胶表面多余的液体。 3.用一张SaranWarp膜覆盖在凝胶上,用梳子宽的一端或折叠的Kimwipe纸巾除去SaranWrap膜中的气泡或皱褶。 4.在紫外透射光源上放一张SaranWrap膜,将凝胶倒置,放在透射光源上,移去玻璃板,凝胶便留在SaranWrap膜上。 5.凝胶摄影参见方案“琼脂糖凝胶中DNA的检测”。 |
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发布于 : 2018-08-06
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