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| 实验方法原理 | 与琼脂糖凝胶不同，聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭，因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而，电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光，所以检测DNA的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBRGold(Molecularprobes)进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。它也不能在聚合过程中掺入到凝胶中，这样会妨碍DNA的迁移并使DNA条带变形。亚甲蓝染色检测的灵敏度低，但较之前两种染料价格低廉，也可选用。 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 溴化乙锭溶液SYBRGold贮存液或亚甲蓝贮存液 仪器、耗材 | 聚丙烯酰胺凝胶 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液和溶液 染料溶液：溴化乙锭溶液（贮存液0.5μg/ml),SYBRGold贮存液或亚甲蓝贮存液（0.001%~0.0025%,TAE缓冲液配制） 2.凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 二、方法 1.将凝胶及其附着的玻璃板轻轻地浸入需用染色液中，染色液正好将凝胶没住即可。室温染色30~45min。 2.以玻璃板为支撑物将凝胶从染色液中取出，水冲洗后用一叠Kimwipes纸巾蘸去凝胶表面多余的液体。 3.用一张SaranWarp膜覆盖在凝胶上，用梳子宽的一端或折叠的Kimwipe纸巾除去SaranWrap膜中的气泡或皱褶。 4.在紫外透射光源上放一张SaranWrap膜，将凝胶倒置，放在透射光源上，移去玻璃板，凝胶便留在SaranWrap膜上。 5.凝胶摄影参见方案“琼脂糖凝胶中DNA的检测”。 |
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发布于 ： 2018-08-06
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