
Description: Application: Features: Suitablesamples:Agarosegelslices DNAisolationsize:100bp-10kbp |
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不懂得请别粘贴那些有的没的,浪费资源
采用的给全部分
1、DNA提取问题:现在核算提取试剂盒大部分都是吸附柱法,相信你应该不会操作错误,如果提取之后进行核酸定量结果很低的话,试着再最后一步溶解核算的时候把水稍微加温(37℃就可以了),溶解时间稍微长一些,然后再离心的时候采用分次离心,比如开始你用200ul溶解的话,你可以分两次用100ul水溶解离心,这样可以提高DNA的产率.
2、电泳问题:如果你核酸定量浓度不低的话就考虑电泳问题,电泳的时候加上1kb的marker,如果marker跑不出来说明你凝胶有问题,一般只要marker跑出来了,DNA浓度又比较高,而没有条带这样的现象很少见,DNA提取比较简单而且相当稳定,本人当时做甲基化提取的DNA有一次拿出来电泳忘了放回冰箱了,结果大夏天的在外面放了一天,心怀忐忑的进行了一次电泳,结果条带依然给力,一点都没有降解.
buffer P1:除去RNA
buffer P2:裂解细胞
buffer P3:沉淀DNA
buffer WA、buffer WB:都是洗涤液(这两个之间有什么区别我也不清楚)
TE:溶解DNA.
能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并最大限度的降低RNA污染。3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切都后续实验之中。5. 对腐植酸含量特别高的样品,附加额外的处理方法。注:对于去除腐植酸的方法在使用以下任何一种方法之前,请预先准备5.5M的异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate)溶液方法A:1.当操作到土壤DNA提取试剂盒的第九步时,使用14,000 x g (~约5秒)的短时离心替代硅珠的自然沉降,移除上清。2.用1ml事先准备好的异硫氰酸胍溶液洗涤、重悬硅珠。3.14,000 x g (~约5秒)短时离心该离心管,除去上清。4.重复上述的洗涤步骤,直到硅珠恢复到原先的颜色。5.最后一次洗涤之后,用1ml的异硫氰酸胍溶液重悬硅珠,将600μl重悬液转移到SPIN filter里,14,000 x g离心1分钟。6.移除接液管中的废液,将剩余的重悬液转移至SPIN filter里,14,000 x g离心1分钟,弃去废液。7.从提取试剂盒操作说明的第十二步开始继续操作。方法B:1.将下列成分混合于1.5ml的离心管中,组成腐植酸洗涤液:978 μl Sodium Phosphate Buffer122 μl MT Buffer250 μl PPS2.充分混匀后,全速离心1分钟,将上清转移到一个新的离心管中(容量大于或等于2ml)3.加入等体积的5.5M的异硫氰酸胍溶液、混匀。4.完成了土壤试剂盒操作说明中的第九步后,将500μl的腐植酸洗涤液加入SPIN filter5.14,000 x g离心1分钟,弃去废液。6.重复上述的洗涤步骤,直到硅珠恢复到原先的颜色。7.从提取试剂盒操作说明的第十二步开始继续操作。
大家都用过哪些DNA提取试剂盒,能不能推荐几种

