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1.Spindown1.5mlofovernightcultureineppiefor1minuteonhigh.

2.AspriratesupernatantandresUSPendcellpelletin100µlSolutionI(25mMTris-HCl,pH8.0,10mMEDTA).

3.Add200µlSolutionII(0.2NNaOH,1.0%SDS)andmixgentlybyinversion.

4.Add150µlSolutionIII(3MKOAc,pH4.8[60ml5MKOAc,11.5mlHOAc,28.5mlH2O]),vortexbrieflytomix,andspinfor5minutesonhigh.

5.Transfersupernatanttofreshtubecontaining500µlphenol:chloroform,vortexandspinfor5minutesonhigh.

6.Transferaqueouslayertofreshtubecontaining1mlethanol,mixwellbyinversion,andspinfor5minutesonhigh.

7.Removesupernatantandwashpelletwith100µl75%ethanol,spinfor1minute.

8.RemoveasmuchofethanolaspossIBLeanddrytubesbyleavingonbenchwithlidsopenfor~5minutes.

9.ResuspendDNAin40µlof20µg/mlRNaseAH2O.

10.Usefortransformation,restrictiondigestion,sequencing,etc.

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发布于： 2018-12-26 阅读（206）

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