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最近,我看了很多这方面的资料,但是我对这个方面不是很了解,所以现在搞得头昏眼花的,不知道该选什么酶和载体,希望大家多多帮忙
在此十分感谢
B、酶大部分是蛋白质、少量是RNA,故某种酶的基本组成单位是氨基酸或核糖核苷酸,B错误;
C、内分泌细胞能产生激素,活的细胞能产生酶,故能产生激素的细胞就能产生酶,C正确;
D、酶通常是蛋白质,蛋白质在低温条件下更加稳定,利于保存,而且低温不会使酶失活,因此在最适温度保存没有意义,D错误.
相同点:都能以DNA为模板,从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶没有,当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性,还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对,所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程;DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程
不同点:
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP;DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物,而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能,而DNA聚合酶没有,当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性,而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性,还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对,所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程;DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程。
聚合酶就是多功能的dna的制作机器
我用来扩增一个1.1kb的基因,用TAKARA的EXtaq和其他的总是出现突变不知道这个酶能不能完全保真,另外末端是否加A
解旋酶:在DNA复制、转录时,作用于DNA双链,将双链DNA解开形成单链。
RNA聚合酶:在转录过程中,作用于游离的核糖核苷酸,将它们连接形成mRNA链
下面是六种不同耐热聚合酶的比较:
Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。
Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。
TaqPlus:集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。
HotstartTaq:经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下,活性被化学基团封闭,要在94℃-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应,避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增,提高了反应的灵敏度和特异性。
LongTaq:具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶,它不但扩增效率高而且错配率低,对于简单模板可扩增长达40kb的模板,对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。
TaqPlatinum:热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高,而用Pfu扩增有难度,可选用TaqPlatinum,一般扩增长度可达4kb。
根据不同的实验目的选择最合适的酶,
克隆普通长度的目的DNA片段:Taq、TaqPlus
保真度要求较高,片段比较短,如点突变、基因筛选等:Pfu、TaqPlatinum
高保真长片段扩增,如构建基因图谱及分子遗传学研究等:LongTaq、TaqPlus
扩增基因组模板,需要降低背景:HotstartTaq、TaqPlatinum
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板:TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum
实时荧光定量PCR反应:Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum
从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段:Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix
模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带:2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix

