EnoGeneFec™ 2200 Transfection ReagentPDF
Catalog Number:
EGF2200-1500Amount:
1500μlStorage/Stability:
and stabilityEnoGeneFec™ 2200 Transfection Reagent is provided in 1μg/μL concentration. It is shipped at room temperature and is stabilized for extended storage at +4°C for one year when very tightly closed.产品介绍EnoGene新推出的EnoGeneFec™ 转染试剂以最高的转染效率、使用方便、细胞毒性小、生物可降解为设计宗旨,EnoGene的新型配方克服了常见的阳离子或脂质体转染试剂带来的细胞毒性作用,更适合做长效和瞬时转染。使用这种新的转染试剂操作方便,可用于转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等,在实际使用中获得了非常理想的效果。EnoGeneFec™ 2200是针对原代细胞设计的转染试剂,可用于体外转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等。对常用的原代细胞转染效率可达60%以上。EnoGeneFec™ 2200可以形成微小的(平均大小约100-400nm)单层脂质体,靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面,并与寡核苷酸等能形成稳定的较小的纳米胶体颗粒,通过细胞"内吞作用"进入细胞,能吸收溶酶体的H+,在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活,保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后,复合体囊泡肿胀破裂,将DNA释放到细胞质中,实现基因转染。。EnoGeneFec™ 2200与其他转染试剂相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势,主要表现为:●转染效率很高,对大多数原代贴壁或原代悬浮细胞使用效果综合评价明显高于其它常用转染试剂●细胞毒性低,需要转染较大剂量的DNA时,毒性明显低于其它常用转染试剂●操作简单,以最短的时间完成转染,转染试剂-DNA复合物的形成时间只需20min试剂盒组分组分EnoGeneFec™ 2200 Transfection ReagentEGF2200-5000.5mlEGF2200-10001mlEGF2200-15001.5ml操作步骤(以6孔板为例)对于原代贴壁细胞:转染前18-24小时使用完全培养基在6孔细胞培养板,每孔接种2ml 细胞培液(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),约为1-3×105个细胞,转染前细胞密度应达到70-90%。若使用其他的培养板或培养皿,可以参照表1中提供的孔(或皿)表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2200加量。表1:细胞培养孔(或皿)表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2200加量培养板表面积(cm2/孔or皿)可容纳培养基体积(ml/孔or皿)DNA(或其他核苷酸类成分)用量(µg)EnoGeneFec™ 2200用量待加的无血清、无抗生素的培养基体积96孔0.30.1-0.20.2μg溶于 20 μl 培养基0.4μl 溶于 20 μl培养基50μl24孔20.50.2-1 μg溶于 25 μl 培养基2-4 μl 溶于 25 μl培养基0.4ml12孔41.00.5-2.0 μg溶于 100 μl培养基4-8 μl 溶于 100 μl培养基0.6ml6孔102.01.0-5.0 μg溶于 100 μl培养基10-20 μl 溶于 100 μl培养基0.8ml35 mm102.01.0-5.0 μg溶于 100 μl培养基10-20μl 溶于 100培养基0.8ml60mm205ml3.0-10.0μg 溶于 500 μl培养基10-20μl 溶于 500培养基2.4ml10-cm6010ml8.0-20.0 μg 溶于 1.5ml培养基90-200μl 溶于 800μl培养基6.4ml2. 转染复合物的制备:溶液A:将5µg 质粒DNA(或其他核苷酸类成分)加入到100μl无血清、无抗生素的培养基,在1.5ml无菌EP管中混匀后,室温放置5分钟。溶液B:EnoGeneFec™ 2200在使用前请震荡混匀。将10-20µl EnoGeneFec™ 2200加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中,在1.5ml无菌EP管中混匀,室温放置5分钟。将溶液A加入到溶液B中,轻轻混匀,室温放置20分钟,获得约200μl转染复合物 (注:该转染复合物在室温下5小时内是稳定的)。3.将800μl 无血清、无抗生素的培养基加入到上述的200μl转染复合物中,轻轻混匀,获得约1.0ml转染复合物溶液。将培养板中的培养基弃去,将获得的1.0ml转染复合物溶液加入到培养孔中覆盖细胞。4. 于5-8小时后,弃去每孔中的转染复合物溶液,加入2.0ml完全培养基(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),37℃孵育转染细胞18-24小时。6. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染,于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),传代次日可以换用选择培养基。对于原代悬浮细胞:1. 在制备转染复合物之前1小时,接种0.8ml 无血清、无抗生素的培养基细胞悬液(含3-5×105个细胞)至6孔细胞培养板中。若使用其他的培养板或培养皿,可以参照表1中提供的孔(或皿)表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2200加量。2. 转染复合物的制备:溶液A:将5µg 质粒DNA(或其他核苷酸类成分)加入到100μl无血清、无抗生素的培养基,在1.5ml无菌EP管中混匀后,室温放置5分钟。溶液B:EnoGeneFec™ 2200在使用前请震荡混匀。将10-20µl EnoGeneFec™ 2200加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中,在1.5ml无菌EP管中混匀,室温放置5分钟。将溶液A加入到溶液B中,轻轻混匀,室温放置20分钟,获得约200μl转染复合物 (注:该转染复合物在室温下5小时内是稳定的)。3. 将上述的200μl转染复合物滴加到第一步接种了0.8ml 无血清、无抗生素的培养基细胞悬液 (含3-5×105个细胞)的培养孔中,轻轻混匀。4. 于5-8小时后,培养孔中加入0.1ml血清(可含抗生素),37℃孵育转染细胞18-24小时。5. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染,于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中(根据细胞培养条件,可含血清及抗生素),传代次日可以换用选择培养基。注意事项1. 质粒DNA的质量使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的结果,建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测。DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)×稀释倍数,另外通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280)估计核酸的纯度,OD260/OD280=1.8说明DNA样本纯度较高。转染细胞的要求细胞的传代次数是影响转染效果的重要因素,推荐使用在5代以内的原代细胞进行转染试验。3. 血清的影响在EnoGeneFec™ 2200和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。4. EnoGeneFec™ 2200的用量为了达到更高的转染效率,对于接种细胞密度在70%-90%之间的样本,可通过预试验在EnoGeneFec™ 2200(μl)∶DNA(μg)=1∶1 - 5∶1之间选择最佳的比例。EnoGeneFec™ 2200(μl)∶DNA(μg)的推荐比例为2∶1或5:1。对于一般细胞,2:1即可获得理想转染效果;对于较难转染的细胞,建议使用5:1。五、储存EnoGeneFec™ 2200以1μg/μl浓度液体形式提供,保存在4℃。常温运输。保存期:一年Price:
370$Research Area:
Stem Cells Cancer Cardiovascular Cell Biology Epigenetics & Nuclear Signaling Developmental Biologys Immunology Drug Discovery Products Metabolism Neuroscience Signal Transduction

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⑴ 躯体症状:眩晕,无力,震颤, 恶心,困倦,皮肤感觉异常,视力模糊。
⑵ 感觉症状:物体的形状扭曲,颜色改变,注意力无法集中,自我感觉听力显著提高,少数情况下会出现感觉错乱(如听到颜色,看到声音等)。
⑶ 精神症状:情绪改变(欣喜,悲伤或易激惹),紧张,时间感扭曲,无法表达自己的想法,人格解体,梦境般的感觉, 视幻觉。
上述症状只是概要性的,致幻剂所产生的效应是因人因时因地而异的,至今仍无法有一个绝对全面的描述。 1938年Albert Hofmann合成了LSD,这是继他致力于麦角碱研究数年来合成的第25个化合物,因此称为LSD-25,以前合成的数个药物已经在临床上使用,包括methergine用于产科止血,hydergine用于治疗偏头痛。开始Hofmann是想合成一个呼吸兴奋剂,但是动物实验发现LSD-25没有呼吸兴奋作用,因此没有对此进行进一步研究。1943年在一次合成LSD-25的实验后,Hofmann有了一次不同寻常的精神体验,他认为这可能是由于实验过程中吸入或接触到了微量的LSD所致,因此于4月19日进行了著名的自体实验,证实250微克LSD确实引起了非常明显的精神效应,且持续数小时。这是人类历史上第一次发现了一种药效如此强大的能够显著改变人的意识的药物[6]。此后,Sandoz公司向全世界许多实验室提供LSD进行研究。基于LSD在精神方面的作用,许多精神学家使用LSD进行精神辅助治疗。整个上世纪五十年代到六十年代中期,全世界发表了超过1000篇临床研究论文,涉及40000多名患者,出版了数十本书,并召开过6次有关致幻剂精神治疗的国际会议,治疗的疾病包括酒瘾,强迫症,儿童自闭症等。还有一些研究涉及晚期癌症患者,发现LSD能够减少患者镇痛药的用量,患者对死亡的恐惧明显减少,在平静中死去。然而,伴随着对致幻剂医疗用途的探索,致幻剂在特定人群中出现了以娱乐为目的的使用,尤其是五十年代西方社会嬉皮士运动的兴起,为以LSD为代表的致幻剂的滥用推波助澜。到了六十年代初,LSD的滥用波及了西方社会的各个阶层,在教会间开始流行,随之而来的是有关因在无医学监督的环境中随意使用致幻剂而死亡的报道。LSD实验还成为探索宗教和神秘体验本质的新动力。研究宗教的学者和哲学家们在讨论是否在LSD迷醉期间常被发现的宗教和神秘体验是真实的,即与自发的神秘宗教启蒙是否是一样的。在这种背景下,各国政府纷纷将LSD列为管制药,宣布持有和使用该药为非法,并不再资助此类医学研究。迫于压力,Sandoz公司也于1965年发表声明,停止提供LSD进行研究。这一系列措施的结果是科学家发现有关致幻剂的研究获得审批以及经费越来越困难,有关前述精神治疗的研究也多无定论。这样,致幻剂临床研究的热潮慢慢退去。整个七十年代初到九十年代末的30年间,仅有零星的使用致幻剂进行精神治疗的报道,也多数是LSD之外新出现而未被管制的药物,如DPT。目前,全世界仅有几个小组在进行致幻剂研究,主要分布在瑞士和美国。最新的一篇论文发表于2006年8月期的psychopharmacology杂志上,通过在教堂是实验数据分析,约翰霍普金斯大学的Roland Griffiths发现致幻剂psilocybin单次使用能够在具有宗教信仰的人产生宗教体验,且对使用者的影响持续长达2个月。这一报道引起极大轰动,杂志主编专门邀请了4名专家对此进行评论,许多国家的媒体对此进行了报道。与此相呼应的是,2006年1月份,在瑞士Albert Hofmann的家乡举办了庆祝Hofmann 100周岁的国际会议,会上Hofmann本人及许多领域内的专家呼吁政府应考虑放开被禁锢了三十年的致幻剂人体研究,以进一步探索致幻剂用于临床精神治疗的可能性。值得注意的是,Griffiths的研究1999年就已开始,其后为获得政府相关部门的审批耗费了大量时间,使得这一研究在6年以后才最终完成并公开发表。欧美国家是否因此会将有关的政策会进行松动,仍是一个未知数。
前言:临床研究设计是临床科研工作的重要内容。严谨、科学、合理的临床研究设计才有可能对临床问题的解决有参考意义。临床研究中常用设计方案的特征、使用范围及实施方法等内容是临床研究开展的第一步,但在实际临床研究设计过程中常遇到一些问题或存在不规范情况,尤其是我们的医学研究生和青年医生们,以下结合实例讲解做简要总结。
备注:此PPT为研究生科研培训系列内容,仅供医务工作者及医学生交流使用,请关注后续更多分析,谢谢!
附:
1.《科研培训系列:如何高效检索和获取医学文献》
请问各位园子里的大神,假设从一项已经完结的多中心随机对照(其Primaryendpoints是1年的全因死亡事件)拿到了一个单中心的患者资料,并且对这部分病人进行了3年全因死亡的随访(此时距离原来的RCT结束已经有了2年),那么这部分结果发表的论文能算原有RCT的一个single-centersub-analysis吗?
Briefly,对多中心RCT的其中一个中心(single-center)继续进行更长时间的随访,这样的研究还能算XXXRCT的substudy吗?可以的话有没有相关已发表的文献支持?从本质上讲,这是不是就是双向队列研究?
上学的时候,学生做的是实验,绝大多数是(老师/教材)事先设计好的。学生按照既定的操作程序,得出可预知的结果,叫实验。
对于结果不可预知的,就叫试验了。比如,有一个新药,没有在临床上使用过,你当然可以预设一个结论,但是,不能百分之百确定经过临床使用一定能得到这个结果,经过严格设计的临床试验,有可能得到预设的结论,也有可能得到相反的结论。这种就是试验。
我硕士博士期间都在做临床研究(现在还有2年多毕业),如果想在博士期间或者毕业后到国外(特别是好的团队)继续学习临床研究的话,有什么途径,需要往哪方面努力呢?请各位前辈同道指点!
注:本人本硕博均985院校,导师名气不错,平台还挺好的。不过本人不才,还没有文章产出。参与了两个多中心的临床研究,希望接下来一年可以产出一篇

