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enogene/EnoGeneFec™ 2200 Transfection Reagent/1500μl/EGF2200-1500
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EnoGeneFec™ 2200 Transfection ReagentPDF
Catalog Number:
EGF2200-1500Amount:
1500μlStorage/Stability:
and stabilityEnoGeneFec™ 2200 Transfection Reagent is provided in 1μg/μL concentration. It is shipped at room temperature and is stabilized for extended storage at +4°C for one year when very tightly closed.产品介绍EnoGene新推出的EnoGeneFec™ 转染试剂以最高的转染效率、使用方便、细胞毒性小、生物可降解为设计宗旨，EnoGene的新型配方克服了常见的阳离子或脂质体转染试剂带来的细胞毒性作用，更适合做长效和瞬时转染。使用这种新的转染试剂操作方便，可用于转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等，在实际使用中获得了非常理想的效果。EnoGeneFec™ 2200是针对原代细胞设计的转染试剂，可用于体外转染质粒、线性双链DNA、反义寡核苷酸及RNAi等。对常用的原代细胞转染效率可达60%以上。EnoGeneFec™ 2200可以形成微小的（平均大小约100-400nm）单层脂质体，靠静电作用结合到DNA的磷酸骨架上以及带负电的细胞膜表面，并与寡核苷酸等能形成稳定的较小的纳米胶体颗粒，通过细胞"内吞作用"进入细胞，能吸收溶酶体的H+，在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活，保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后，复合体囊泡肿胀破裂，将DNA释放到细胞质中，实现基因转染。。EnoGeneFec™ 2200与其他转染试剂相比无论在转染效果和实验操作上都有明显的优势，主要表现为：●转染效率很高，对大多数原代贴壁或原代悬浮细胞使用效果综合评价明显高于其它常用转染试剂●细胞毒性低，需要转染较大剂量的DNA时，毒性明显低于其它常用转染试剂●操作简单，以最短的时间完成转染，转染试剂-DNA复合物的形成时间只需20min试剂盒组分组分EnoGeneFec™ 2200 Transfection ReagentEGF2200-5000.5mlEGF2200-10001mlEGF2200-15001.5ml操作步骤（以6孔板为例）对于原代贴壁细胞：转染前18-24小时使用完全培养基在6孔细胞培养板，每孔接种2ml 细胞培液（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），约为1-3×105个细胞，转染前细胞密度应达到70－90%。若使用其他的培养板或培养皿，可以参照表1中提供的孔（或皿）表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2200加量。表1：细胞培养孔（或皿）表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2200加量培养板表面积(cm2/孔or皿)可容纳培养基体积（ml/孔or皿）DNA（或其他核苷酸类成分）用量（µg）EnoGeneFec™ 2200用量待加的无血清、无抗生素的培养基体积96孔0.30.1-0.20.2μg溶于 20 μl 培养基0.4μl 溶于 20 μl培养基50μl24孔20.50.2-1 μg溶于 25 μl 培养基2-4 μl 溶于 25 μl培养基0.4ml12孔41.00.5-2.0 μg溶于 100 μl培养基4-8 μl 溶于 100 μl培养基0.6ml6孔102.01.0-5.0 μg溶于 100 μl培养基10-20 μl 溶于 100 μl培养基0.8ml35 mm102.01.0-5.0 μg溶于 100 μl培养基10-20μl 溶于 100培养基0.8ml60mm205ml3.0-10.0μg 溶于 500 μl培养基10-20μl 溶于 500培养基2.4ml10-cm6010ml8.0-20.0 μg 溶于 1.5ml培养基90-200μl 溶于 800μl培养基6.4ml2. 转染复合物的制备：溶液A：将5µg 质粒DNA（或其他核苷酸类成分）加入到100μl无血清、无抗生素的培养基，在1.5ml无菌EP管中混匀后，室温放置5分钟。溶液B：EnoGeneFec™ 2200在使用前请震荡混匀。将10-20µl EnoGeneFec™ 2200加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中，在1.5ml无菌EP管中混匀，室温放置5分钟。将溶液A加入到溶液B中，轻轻混匀，室温放置20分钟，获得约200μl转染复合物 （注：该转染复合物在室温下5小时内是稳定的）。3.将800μl 无血清、无抗生素的培养基加入到上述的200μl转染复合物中，轻轻混匀，获得约1.0ml转染复合物溶液。将培养板中的培养基弃去，将获得的1.0ml转染复合物溶液加入到培养孔中覆盖细胞。4. 于5-8小时后，弃去每孔中的转染复合物溶液，加入2.0ml完全培养基（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），37℃孵育转染细胞18-24小时。6. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染，于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），传代次日可以换用选择培养基。对于原代悬浮细胞：1. 在制备转染复合物之前1小时，接种0.8ml 无血清、无抗生素的培养基细胞悬液（含3-5×105个细胞）至6孔细胞培养板中。若使用其他的培养板或培养皿，可以参照表1中提供的孔（或皿）表面积和体积相应的调整细胞接种数、EnoGeneFec™ 2200加量。2. 转染复合物的制备：溶液A：将5µg 质粒DNA（或其他核苷酸类成分）加入到100μl无血清、无抗生素的培养基，在1.5ml无菌EP管中混匀后，室温放置5分钟。溶液B：EnoGeneFec™ 2200在使用前请震荡混匀。将10-20µl EnoGeneFec™ 2200加入到100μl 无血清、无抗生素的培养基中，在1.5ml无菌EP管中混匀，室温放置5分钟。将溶液A加入到溶液B中，轻轻混匀，室温放置20分钟，获得约200μl转染复合物 （注：该转染复合物在室温下5小时内是稳定的）。3. 将上述的200μl转染复合物滴加到第一步接种了0.8ml 无血清、无抗生素的培养基细胞悬液 （含3-5×105个细胞）的培养孔中，轻轻混匀。4. 于5-8小时后，培养孔中加入0.1ml血清（可含抗生素），37℃孵育转染细胞18-24小时。5. 收集细胞用于分析。如要建立稳定转染，于转染24小时后将细胞按1:10传代至新鲜培养基中（根据细胞培养条件，可含血清及抗生素），传代次日可以换用选择培养基。注意事项1. 质粒DNA的质量使用高纯度的质粒DNA也是转染试验中的关键因素。为了保证试验的结果，建议对提取的质粒DNA的量和纯度进行检测。DNA含量(μg/mL)=50×(260 nm的读数)×稀释倍数，另外通过检测质粒DNA在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280）估计核酸的纯度，OD260/OD280=1.8说明DNA样本纯度较高。转染细胞的要求细胞的传代次数是影响转染效果的重要因素，推荐使用在5代以内的原代细胞进行转染试验。3. 血清的影响在EnoGeneFec™ 2200和DNA形成转染复合物的过程中不能添加血清。4. EnoGeneFec™ 2200的用量为了达到更高的转染效率，对于接种细胞密度在70%-90%之间的样本，可通过预试验在EnoGeneFec™ 2200（μl）∶DNA（μg）=1∶1 - 5∶1之间选择最佳的比例。EnoGeneFec™ 2200（μl）∶DNA（μg）的推荐比例为2∶1或5：1。对于一般细胞，2：1即可获得理想转染效果；对于较难转染的细胞，建议使用5：1。五、储存EnoGeneFec™ 2200以1μg/μl浓度液体形式提供，保存在4℃。常温运输。保存期：一年Price:
370$Research Area:
Stem Cells Cancer Cardiovascular Cell Biology Epigenetics & Nuclear Signaling Developmental Biologys Immunology Drug Discovery Products Metabolism Neuroscience Signal Transduction
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2018-08-10
初步掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实紫外线的杀菌效果，并了解影响其效果的因素；了解滤菌器的除菌方法；观察常用化学消毒剂的抑菌作用。 查看更多
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2018-12-26
Yale RNA prep(Rebecca D. Burdine, Michael J. Stern [modified by S.M. Hettenbach]) Add 8 ml of TRIZOL to 2 ml packed worms in 15 ml centrifuge tube. Vortex and 查看更多
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2018-08-05
该实验方法来源于第四军医大官网 查看更多
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2021-07-24
总RNA提取可以：（1）获得高纯度、高质量的总RNA；（2）可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR 和阵列分析所需。 查看更多
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2018-08-03
碱裂解法提取质粒DNA的基本原理是溶液Ⅰ使细胞悬浮并且EDTA可以与Ca2+ 和Mg2+ 螯和，抑制DNase的活性，溶液II裂解细菌，变性蛋白质和少量质粒，溶液Ⅲ使大部分蛋白质与细菌基因组DNA一起被共沉淀，质粒DNA复性。此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切PCR 扩增。 查看更多
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2018-08-05
YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。 查看更多
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2018-08-10
使用基因融合表达系统在大肠杆菌中表达外源基因已越来越受欢迎，这在很大程度上归因于融合条统能够产生大量的可溶性的融合蛋白。 查看更多
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2018-08-05
RP-HPLC 越来越多地应用于蛋白质的分离，主要包括分析型和制备型。但如果要求纯化过的蛋白能够恢复活性并重新折叠为正确的三维结构，则不建议使用 RP-HPLC，因为许多蛋白在有机溶液中会发生不可逆变性。反相支持物（骨架）上的蛋白分析也会碰到低的回收率、畸形峰、「鬼峰（ghosting)」（即某个蛋白峰在进行下次色谱分析时虚假地再次出现）等问题。[澳] 理查德 J. 辛普森 (Richard J.Simpson) 主编 何大澄 主译 查看更多
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2018-12-26
Worm PCRPick one worm and place it in a 2.5 l drop of lysis buffer in the cap of a PCR tube. Close and centrifuge briefly to move to the bottom of the tube. Fr 查看更多
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2018-08-06
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。 查看更多
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2018-12-26
N2 development times at different temperaturesby Michael KoelleDetermined empirically; times in hours are given from the first division of the zygote.15°20°25° 查看更多
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2018-08-06
上皮细胞可来源于外，内、中三个胚层；但培养中只有源于外和内胚层的细胞能反映出上皮细胞的特征细胞呈膜状生长的特点。而间皮和内皮刚接种培养和细胞量少时常呈成纤维细胞型，只有细胞数量较多时，才能显出膜状特点。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社） 查看更多
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探讨临床医学的特点 123
2018-01-25
临床医学研究有哪些特点
临床试验IV期干预性和非干预试验区别是啥?IV期CRA为啥还会有...123
chency520hg0072021-07-21
The ICMJE defines a clinical trial as any research project that prospectively assigns people to an intervention, with or without concurrent comparison or control groups, to study the cause-and-effect relationship between a health-related intervention and a health outcome.
这里对临床试验的要求都是干预性（interventional）的。
也有非干预性的规定，这里没贴下，fa你私信了。
这里对临床试验的要求都是干预性（interventional）的。
也有非干预性的规定，这里没贴下，fa你私信了。
临床试验申请书123
Kyoya27PL72021-08-10
临床试验申请书：
在非基地的医疗机构进行临床研究须填报药品临床研究申请表，并报国家药品监督管理局批准。
这是国药管安[2000]315号“关于印发《药品临床研究的若干规定》的通知”的内容 药品临床研究申请表 (非国家药品临床研究基地)试验用药品名称中文名称：英文名称：类 别，中药 化学药，新生物制品 ，放射性药 ，进口药 ，其它第 类临床研究分期Ⅰ期， Ⅱ期 ，Ⅲ期 Ⅳ期 ，生物等效性试验 ，临床验证剂， 型申办单位申请日期， 年， 月 ，日临床研究预期时间年 ，月 至 ，年 ，月批准文号临床研究负责单位病例总数例临床研究协作单位基地单位非基地单位安监司核查意见注册司审批意见。
在非基地的医疗机构进行临床研究须填报药品临床研究申请表，并报国家药品监督管理局批准。
这是国药管安[2000]315号“关于印发《药品临床研究的若干规定》的通知”的内容 药品临床研究申请表 (非国家药品临床研究基地)试验用药品名称中文名称：英文名称：类 别，中药 化学药，新生物制品 ，放射性药 ，进口药 ，其它第 类临床研究分期Ⅰ期， Ⅱ期 ，Ⅲ期 Ⅳ期 ，生物等效性试验 ，临床验证剂， 型申办单位申请日期， 年， 月 ，日临床研究预期时间年 ，月 至 ，年 ，月批准文号临床研究负责单位病例总数例临床研究协作单位基地单位非基地单位安监司核查意见注册司审批意见。
【求助】回顾性研究是否需要临床试验注册? 循证医学123
姿医er_Jomo2021-08-15
有没有哪位知道回顾性临床研究是不是要注册？，怎么注册的问题
如何高效准确地完成临床研究?试试这项神技能123
叿侄敄2021-08-02
在长期相处中，宁母被小倩的勤劳善良感动，但仍担心其鬼魂身份，不能生育。小倩告知，采臣天注福册，命有三子。宁母答应。采臣与小倩终成眷属。
新药临床前研究内容有哪些方面 123
天堂狗15022021-07-28
临床前
小试产品--药效筛选--制备工艺优化数据---质量标准---中试放大---药理毒理----药剂工艺----稳定性实验----资料整理报批
临床
各类新药视类别不同进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期临床试验
主要是I期安全性
II期有效性
Ⅰ期临床试验
在新药开发过程中,将新药第一次用于人体以研究新药的性质的试验,称之为Ⅰ期临床试验.即在严格控制的条件下,给少量试验药物于少数经过谨慎选择和筛选出的健康志愿者(对肿瘤药物而言通常为肿瘤病人),然生仔细监测药物的血液浓度排泄性质和任何有益反应或不良作用,以评价药物在人体内的性质.Ⅰ期临床试验通常要求健康志愿者住院以进行24小时的密切监护.随着对新药的安全性了解的增加,给药的剂量可逐渐提高,并可以多剂量给药.通过Ⅰ期临床试验,还可以得到一些药物最高和最低剂量的信息,以便确定将来在病人身上使用的合适剂量.可见,Ⅰ期临床试验是初步的临床药理学及人体安全性评价试验,目的在于观测人体对新药的耐受程度和药代动力学,为制定给药方案提供依据.
Ⅱ期临床试验
通过Ⅰ期临床研究,在健康人身上得到了为达到合理的血药浓度所需要的药品的剂理的信息,即药代动力学数据.但是,通常在健康的人体上是不可能证实药品的治疗作用的.
在临床研究的第二阶段即Ⅱ期临床试验,将给药于少数病人志愿者,然后重新评价药物的药代动力学和排泄情况.这是因为药物在患病状态的人体内的作用方式常常是不同的,对那些影响肠、胃、肝、和肾的药物尤其如此。
以一个新的治疗关节炎的止通药的开发为例。Ⅱ期临床研究将确定该药缓解关节炎病人的疼通效果如何，还要确定在不同剂量时不良反应的发生率的高低，以确定疼痛得到充分缓解但不良反应最小的剂量。
可以说，Ⅱ期临床试验是对治疗作用的初步评价阶段。Ⅱ期临床试验一般通过随机盲法对照试验（根据具体目的也可以采取其他设计形式），对新药的有效性和安全性作出初步评价，并为设计Ⅲ期临床试验和确定给药剂量方案提供依据。
Ⅲ期临床试验
在Ⅰ，Ⅱ期临床研究的基础上，将试验药物用于更大范围的病人志愿者身上，进行扩大的多中心临床试验，进一步评价药物的有效性和耐受性（或安全性），称之为Ⅲ期临床试验。Ⅲ期临床试验可以说是治疗作用的确证阶段，也是为药品注册申请获得批准提供依据的关键阶段，该期试验一般为具有足够样本量的随机化盲法对照试验。临床试验将对试验药物和安慰剂（不含活性物质）或已上市药品的有关参数进行比较。试验结果应当具有可重复性。
可以说，该阶段是临床研究项目的最繁忙和任务最集中的部分。除了对成年病人研究外，还要特别研究药物对老年病人，有时还要包括儿童的安全性。一般来讲，老年病人和危重病人所要求的剂量要低一些，因为他们的身体不能有产地清除药物，使得他们对不良反应的耐受性更差，所以应当进行特别的研究来确定剂量。而儿童人群具有突变敏感性、迟发毒性和不同的药物代谢动力学性质等特点，因此在决定药物应用于儿童人群时，权衡疗效和药物不良反应应当是一个需要特别关注的问题。在国外，儿童参加的临床试验一般放在成人试验的Ⅲ期临床后才开始。如果一种疾病主要发生在儿童，并且很严重又没有其他治疗方法，美国食品与药品管理局允许Ⅰ期临床试验真接从儿童开始，即在不存在成人数据参照的情况下，允许从儿童开始药理评价。我国对此尚无明确规定。
小试产品--药效筛选--制备工艺优化数据---质量标准---中试放大---药理毒理----药剂工艺----稳定性实验----资料整理报批
临床
各类新药视类别不同进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期临床试验
主要是I期安全性
II期有效性
Ⅰ期临床试验
在新药开发过程中,将新药第一次用于人体以研究新药的性质的试验,称之为Ⅰ期临床试验.即在严格控制的条件下,给少量试验药物于少数经过谨慎选择和筛选出的健康志愿者(对肿瘤药物而言通常为肿瘤病人),然生仔细监测药物的血液浓度排泄性质和任何有益反应或不良作用,以评价药物在人体内的性质.Ⅰ期临床试验通常要求健康志愿者住院以进行24小时的密切监护.随着对新药的安全性了解的增加,给药的剂量可逐渐提高,并可以多剂量给药.通过Ⅰ期临床试验,还可以得到一些药物最高和最低剂量的信息,以便确定将来在病人身上使用的合适剂量.可见,Ⅰ期临床试验是初步的临床药理学及人体安全性评价试验,目的在于观测人体对新药的耐受程度和药代动力学,为制定给药方案提供依据.
Ⅱ期临床试验
通过Ⅰ期临床研究,在健康人身上得到了为达到合理的血药浓度所需要的药品的剂理的信息,即药代动力学数据.但是,通常在健康的人体上是不可能证实药品的治疗作用的.
在临床研究的第二阶段即Ⅱ期临床试验,将给药于少数病人志愿者,然后重新评价药物的药代动力学和排泄情况.这是因为药物在患病状态的人体内的作用方式常常是不同的,对那些影响肠、胃、肝、和肾的药物尤其如此。
以一个新的治疗关节炎的止通药的开发为例。Ⅱ期临床研究将确定该药缓解关节炎病人的疼通效果如何，还要确定在不同剂量时不良反应的发生率的高低，以确定疼痛得到充分缓解但不良反应最小的剂量。
可以说，Ⅱ期临床试验是对治疗作用的初步评价阶段。Ⅱ期临床试验一般通过随机盲法对照试验（根据具体目的也可以采取其他设计形式），对新药的有效性和安全性作出初步评价，并为设计Ⅲ期临床试验和确定给药剂量方案提供依据。
Ⅲ期临床试验
在Ⅰ，Ⅱ期临床研究的基础上，将试验药物用于更大范围的病人志愿者身上，进行扩大的多中心临床试验，进一步评价药物的有效性和耐受性（或安全性），称之为Ⅲ期临床试验。Ⅲ期临床试验可以说是治疗作用的确证阶段，也是为药品注册申请获得批准提供依据的关键阶段，该期试验一般为具有足够样本量的随机化盲法对照试验。临床试验将对试验药物和安慰剂（不含活性物质）或已上市药品的有关参数进行比较。试验结果应当具有可重复性。
可以说，该阶段是临床研究项目的最繁忙和任务最集中的部分。除了对成年病人研究外，还要特别研究药物对老年病人，有时还要包括儿童的安全性。一般来讲，老年病人和危重病人所要求的剂量要低一些，因为他们的身体不能有产地清除药物，使得他们对不良反应的耐受性更差，所以应当进行特别的研究来确定剂量。而儿童人群具有突变敏感性、迟发毒性和不同的药物代谢动力学性质等特点，因此在决定药物应用于儿童人群时，权衡疗效和药物不良反应应当是一个需要特别关注的问题。在国外，儿童参加的临床试验一般放在成人试验的Ⅲ期临床后才开始。如果一种疾病主要发生在儿童，并且很严重又没有其他治疗方法，美国食品与药品管理局允许Ⅰ期临床试验真接从儿童开始，即在不存在成人数据参照的情况下，允许从儿童开始药理评价。我国对此尚无明确规定。
临床试验的四期实验目的分别是什么_123
2018-01-19
做临床要多少时间分那四期
临床研究中csr是什么意思123
2018-02-24
Clinical Study Report - 临床研究报告
Domains Category List : I(297) I 单词类别 123
煤炭部2021-08-18
《中国实用医药》、《中外医疗》、《中国医药科学》、《中医临床研究》这些都是期刊质量比较好的医药类国家级期刊，但是审核比较慢，要求特别严格，
临床研究生一枚,导师不管,也没师兄师姐,课题完全没方向……该怎么...123
Cindy心羽2021-07-27
研二ing，作为一只临床研究生，学校不疼，导师不爱的，课题现在还没有方向，导师也一直没管我，临床又超级忙，但确实沦为大病历加病程机器，可能自己也不够积极，好抑郁啊，感觉这三年要废过去了，而且好讨厌夜班啊，我是不是没救了。。。。。现在转业也不知道能做什么。。。
临床实验和临床研究有什么区别吗？_咨询实录_123
命中注定的cba2018-02-05
举个例子，或许能说明试验和实验的区别。
上学的时候，学生做的是实验，绝大多数是（老师/教材）事先设计好的。学生按照既定的操作程序，得出可预知的结果，叫实验。
对于结果不可预知的，就叫试验了。比如，有一个新药，没有在临床上使用过，你当然可以预设一个结论，但是，不能百分之百确定经过临床使用一定能得到这个结果，经过严格设计的临床试验，有可能得到预设的结论，也有可能得到相反的结论。这种就是试验。
上学的时候，学生做的是实验，绝大多数是（老师/教材）事先设计好的。学生按照既定的操作程序，得出可预知的结果，叫实验。
对于结果不可预知的，就叫试验了。比如，有一个新药，没有在临床上使用过，你当然可以预设一个结论，但是，不能百分之百确定经过临床使用一定能得到这个结果，经过严格设计的临床试验，有可能得到预设的结论，也有可能得到相反的结论。这种就是试验。
临床试验中主要研究者需具备怎样的条件?飞速度医疗器械注册...123
卖萌滚粗4352021-08-05
从资料上来说，主要研究者需要有GCP证书，证明有进行临床试验的资质；要有个人简历，描述在临床方面的工作时间，做过什么项目，是否有奖项什么的，还是为了证明有承担临床试验主要研究者的资格。从选主研的软性要求来说，最好是找该方向全国知名的专家，这样才有号召力，管理多中心完成试验。
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