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放线菌形态观察实验——印片法
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放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的—类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体,紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”),基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”)并进一步分化产生孢子丝及孢子,有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时,气丝在上层、基丝在下层,气丝色暗,基丝较透明。孢子丝依种类的不同,有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察,放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据为了观察放线菌的形态特征,人们设计了各种培养和观察方法,这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征,本实验介绍其中几种常用方法。实验方法原理将放线菌接种在琼脂平板上,扦上灭菌盖玻片后培养,使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上匾观察时,轻轻取出盖玻片。置于载玻片上直接镜检。这种方法可观......阅读全文


微生物检测中常见的生物化学试验

一、糖类代谢试验1.1糖(醇)类发酵试验不同细菌含有发酵不同糖(醇)的酶,因而发酵糖(醇)的能力各不相同。即使某些能发酵同样的糖(醇),但其产物也不同,有的产酸产气,有的产酸不产气,可根据这些特点来鉴别细菌。大致可分为:液体发酵管:无糖肉汤或蛋白胨水中,加入1%糖(醇)类指示剂,一支小玻


基因工程菌-海洋线虫系统的生物测定

实验概要本实验在成功构建了表达Cip蛋白的重组酿酒酵母的基础上,对其应用于Panagrellus redivivus线虫的生物测定进行了探讨,并与重组大肠杆菌比对。主要试剂1. 主要试剂 1)蛋白胨(Peptone),广州环凯微生物科技有限公司;&nb


食品微生物检验规范!

1. 稀释液的制作磷酸盐缓冲稀释液 贮存液: 磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 蒸馏水 500mL 用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2(图1-1、1-2),用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液:用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器


微生物实际操作技术问答荟萃(三)

食品伙伴网食品论坛,为食品伙伴网资深网友,leizhw雷质文老师开通了“食品微生物监测技术和实验室质量管理”专栏,开通至今,雷老师一直以自身知识和经验,为广大网友解答食品微生物相关问题,帮助很多网友解决了工作中的问题。 感谢雷老师,今天小编汇总了雷老师专栏中的问题解答给大家参考,希望


基因克隆:高效感受态细胞制作

DNA的克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接,然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程,因此DNA克隆又称分子克隆,基因操作或重组实验方法原理主要原理是通过电击法或CaCl2、RbCl(KCl)等化学试剂处理,使细胞膜的通透性发


蛋白质技术——双向电泳

实验概要蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1000个E.coli蛋白,并表明蛋白质谱不是稳定的,而是随环境而变化. 双向电泳原理简明,第一向进行等电聚焦,蛋白质沿pH梯度分离,至各自的等电点;随后,再


细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的菌落观察和细菌菌落制片实验

实验方法原理利用血液培养基富有营养及粘性等特性来培养细菌,在此培养基上生长的菌落在固定时粘性很大,能够牢固地附着在载玻片或盖玻片上,便于制片和观察。另外,血液培养基又是较好的保存菌种用培养基,故由此培养基所制的菌落制片能保存较长时间。实验材料圆褐固氮菌枯草芽孢杆菌灰色链霉菌酿酒酵母白色葡萄球菌试剂、


《微生物检验技术》100个重点小抄版-【必备】

1.硫化氢试验属蛋白质和氨基酸代谢试验。 2.黏质酸盐阴性的克雷伯菌有鼻硬结克雷伯菌。 3.EB可以作为核酸分子电泳的指示剂,其原理是EB插入核酸分子之间并在紫外光下放射荧光。 4.耐高盐、可在8%NaCI胨水中生长的弧菌是副溶血弧菌。 5.钩端螺旋体的传播方式是接触疫


双杂交和其他双成分系统实验(三)

第三阶段 阳性相互作用的再次确定材料缓冲液和溶液乙酸铵(7.5 ml/L)氯仿乙醇异丙醇裂解液酶解酶 100T 以 2~5 mg/ml 溶解于拯救缓冲液中或β-葡糖醛酸酶 100000 单位/ml(Sigma)按 1:50 稀释于拯救缓冲液中每次使用均需配置新鲜的溶液。酚(早衡至 pH8


粽子食品微生物检测

端午马上又要来了,又到吃棕子的时候了,各式各样的粽子已讲上市,粽子 是一种水分高、原料杂、做工较复杂的食品, 容易出现食品安全问题, 需要引起警惕。为保障端午节期间人民群众能够吃到安全放心的粽子,各地食药局每年都会在端午节前进行粽子抽检,保障民众食用安全。由此,环凯公司列出粽子食品微生物检测专项检测


Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被


用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA

这一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法(Blin and Stanfford 1976)。 当需要大量哺乳动物 DNA,如用于 Somhern 杂交或者用噬菌体 λ 载体构建基因组文库时,应选用这一方法。从 5X107培养的非整倍体细胞 ( 如 HeLa 细


大肠杆菌感受态制备与质粒转化

主要试剂1、LB培养基(灭菌后使用)胰蛋白胨(bacto-tryptone) 10g/L酵母提取液(bacto-yeast extract) 5 g/LNaCl 10g/L用NaOH调pH至7.0。2、LB固体平板每升液体培养基中加入15g琼脂粉,高压灭菌后倒入灭过菌的培养皿中。3、SOC培养基20


RT-PCR实验方法总结大全

生物谷: RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存


接种、分离纯化和培养技术

一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。1、接种工具和方法 在实验室或工厂实践中,用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同,接种针的针尖部常做成不同的形状,有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面


食品检验工作要知道

1.多酚氧化酶可使果蔬汁发生褐变。2.碘价是油脂中脂肪酸不饱和程度的主要标志。3.标定AgNO3溶液常用的基准物质是NaCl。4.某样品的质量为8.7030,此数据的有效数字位数为五位。5.测定食品的总酸度时,需配NaOH制标准溶液,称量固体NaOH时,正确的做法是用分析天平准确称量。6.国家标准中


一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒,其基因组含有一段外源核酸序列,通常为编码目标蛋白质的dDNA,在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成


通过杂交筛选未扩增的黏粒文库(滤膜影印)

经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选,该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选(Hanahan and Meselon 1980)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理经黏粒转化的稠密细菌菌落可通过杂交的方法筛选,该方法源于质粒转化菌落的大规模筛选(Hanahan and


小鼠β-actin基因的克隆表达(2) 实验步骤: (1)目的基因与表达载体的连接反应: ①表达载体和目的片段的酶切
miRNA克隆实验

在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外,还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA(noncoding RNA,ncRNA),非编码 RNA 在细胞中起着非常重要的作用,如 rRNA 和 tRNA 维持着基因的表达,还有一部分则起着调控基因表达的作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主


相互作用蛋白的捕获实验

实验材料酵母菌试剂、试剂盒CM培养基乙酸锂PEGTEDMSO甘油氨苄青霉素仪器、耗材离心机分光光度计摇床培养箱实验步骤1. 为了转化文库,将约20 ml 含pSH18-34和pBait 的酵母菌EGY48培养液接种到Glc/CM-Ura-H


质粒DNA的提取与鉴定

本实验采取碱裂解法的方法来提取质粒 ,之后经琼脂糖凝胶电泳来检测DNA。质粒DNA 的提取与鉴定(一)碱裂解法提取质粒[实验原理]碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0~12.5这个狭窄的范围内,线性的DNA双螺旋结构解开而被变


真核表达文库的构建与筛选实验

类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段:1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库;2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体


培养基制备技术

一、玻璃器皿的清洗 在制备培养基的过程中,首先要使用一些玻璃器皿,如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处理,洗刷干净。有的还要进行包装,经过灭菌等准备就绪后,才能使用。1、新购的玻璃器皿 除去包装沾染的污垢后,先用热肥皂水刷洗,流水冲净,再浸泡于1


用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA

放射性标记DNA探针的制备l聚丙烯酰胺凝胶的制备1.按照(三)中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小,200bp左右的片段需要4~5%的凝胶,小


真核表达文库的构建与筛选实验

实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌
真核表达文库的构建与筛选实验

实验材料 宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体包装提取物电转化感受态大肠杆菌试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶缓冲液限制性内切核酸酶通过 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文库含适当抗生素的 Terrific 球脂平板含适当抗生素的 Terrific 肉汤培养基仪器、耗材 cDNA 合成试剂盒实验步骤

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