石蜡包埋组织样品制备方法
| 实验材料 | 组织胰蛋白酶 试剂、试剂盒 | 二甲苯乙醇生理盐水 仪器、耗材 | 尼龙网 实验步骤 | 1.把石蜡包埋组织切成40~50μm厚的组织片3~5片，或用乳钵研成0.5mm直径大小颗粒状，放入10ml的试管中。 2.加入二甲苯5~8ml时，在室温下脱蜡1~2d，视石蜡脱净与否，更换1~2次二甲苯，石蜡脱净后，弃去二甲苯。 3.水化：依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5ml，每步为10min，去乙醇，加入蒸馏水3~5ml，10min后弃之。 4.消化：加入2ml0.5%胰蛋白酶(pH1.5~2.0)消化液，置37℃恒温水浴中消化30min，在消化期间，每隔10min用振荡器振荡1次。 5.消化30min后，立即加生理盐水终止消化。 6.经300目尼龙网过滤，未消化好的组织可做第2次消化。 7.收集细胞悬液，离心沉淀1500r/min，再以生理盐水漂洗1~2次，离心沉淀500~800r/min，去碎片。 8.保存细胞备用。 注意事项 | 1.一定要将石蜡从组织中脱干净，一般脱蜡第1遍应在12h左右，第2遍为30min左右。检测是否将石蜡已脱净的方法是弃去二甲苯，加入无水乙醇，如果无絮状物浮起，即可视为蜡己脱净；反之，则蜡尚未脱净。 2.消化时间不可过长，以免造成已释放出的细胞核被消化。 3.切片不可过薄或过厚，过薄细胞碎片过多，影响分析结果；过厚造成脱蜡不理想。 4.消化后的组织应先用眼科剪刀剪碎，然后再加胃蛋白酶消化，30min，37℃，然后用尖吸管吹打成悬液状。 5.消化后的组织悬液经过过滤后可能细胞数很少，这样就要将组织片放在300目尼龙网上，用底部圆滑的试管磨碎，再用PBS液冲洗一下；如此反复，就能得到较多的单细胞悬液。 |
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发布于 ： 2018-08-10
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