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Selfcircularization of Linear DNA 实验方法

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InamicrocentrifugetubeprepareasolutionoflinearDNA(25-50ng)indeionizedwaterorTEbuffer(10-35µl).
Add:
- 10Xligationbuffer5µl,
- 50%PEG4000solution(forbluntendsonly)5µl,
- deionizedwaterto50µl,
- T4DNALigase5u.Vortexthetubeandspindowninamicrocentrifugefor3-5seconds.
Incubatethemixturefor1hourat22°C.
InactivateT4DNALigasebyheatingreactionmixtureat65°Cfor10minutes.
Resultingreactionmixturecanbeuseddirectlyfortransformation.

References

Sambrook,J.,Russell,D.W.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,thethirdedition,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork,2001.
CurrentProtocolsinMolecularBIOLOGy,vol.1(Ausubel,F.M.,etal.,ed.),JohnWiley&Sons,Inc.,Brooklyn,NewYork,1994-2001.

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发布于： 2018-12-26 阅读（164）

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