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Linker Ligation 实验方法
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Linker Ligation (with T4 DNA Ligase) In a microcentrifuge tube prepare a solution of blunt ended, dephosphorylated DNA (100-500ng) in TE buffer (5-7µl).
Selfcircularization of Linear DNA 实验方法
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In a microcentrifuge tube prepare a solution of linear DNA (25-50ng) in deionized water or TE buffer (10-35µl). Add: 10X ligation buffer 5µl, 50% P
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Prepare a ligation mix:Ligation Mix (2x)10x ligase buffer1.0 mldigested vector(0.1 mg/ml)1.0 mlH2O6.0 mltotal8.0 mldivide ligation mix into two Eppendorf tubes
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一、质粒DNA的提取及鉴定(一)质粒DNA的提取及鉴定 1.收获细菌 (1)将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中,接入一单菌落,于37℃剧烈振荡培养过夜。
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